SYBR Green I荧光 RT-PCR方法检测禽流感病毒

畜牧兽医学报 ›› 2006, Vol. 37 ›› Issue (11): 1189-1193.

SYBR Green I荧光 RT-PCR方法检测禽流感病毒

刘丽玲;姜永萍;王秀荣;陈化兰;魏萍

1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室,兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨 150001;2东北农业大学，哈尔滨 150030

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-11-25 发布日期:2006-11-25

Development of SYBR Green I Reverse-transcription Polymerase Chain Reaction to Detect Avian Influenza Virus

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-11-25 Published:2006-11-25

摘要/Abstract

摘要： 为建立检测禽流感病毒（AIV）的SYBR Green I荧光 RT-PCR方法，根据AIV的 M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞，收集感染6、12、24、48、72 h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测，试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法，并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明：此次建立的检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV，对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%（9/169），而普通RT-PCR方法检出率为6.51%（11/169），病毒滴定检出率为5.62（9/160）。对其他病毒（NDV、IBDV、IBV、VA）则未检测到，且整个检测过程只需4 h，表明该方法特异、准确、快速。

关键词: 禽流感病毒, SYBR Green I RT-PCR, RT-PCR, 病毒滴定, 检测

Abstract: A pair of primers were designed for detection of avian influenza viruses(AIV). 4 isolates belonging to different subtypes were used to infect MDCK cells, then total RNA were extracted from supernatant fluids after infecting 6，12，24，48，72 h. Throat, tracheal swabs samples from chicken were extracted too.SYBR Green I RT-PCR of M gene was done with Rotor Gene 3000 PCR amplifier. We attempted to establish a SYBR Green I RTPCR method to detect AIV.At the same time, the results of SYBR Green I RT-PCR were compared with those of conventional RT-PCR and virus titration.The results showed that the assay was sensitive, specific and rapid enough to detect AIV RNA genome in cell culture supernatant and swabs samples, while other viruses were not detected. As such, the described method is reliable and provides faster detection of AIV than other conventional methods.

Key words: AIV, SYBR Green I RT-PCR, RT-PCR, virus titration, detection

刘丽玲;姜永萍;王秀荣;陈化兰;魏萍. SYBR Green I荧光 RT-PCR方法检测禽流感病毒[J]. 畜牧兽医学报, 2006, 37(11): 1189-1193.

[1]	王素华, 帅江冰, 李舟, 袁淑辉, 吴绍强, 吕继洲, 赵治国. 炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测技术的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1658-1665.
[2]	王素华, 帅江冰, 李舟, 袁淑辉, 吴绍强, 吕继洲, 赵治国. 炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测技术的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1658-1665.
[3]	俞演, 古玉, 王承东, 胡静, 杨瑷宁, 杨乔, 李德生, 张和民, 邓林华, 凌珊珊, 左之才, 彭广能, 钟志军, 马晓平. 石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1449-1457.
[4]	俞演, 古玉, 王承东, 胡静, 杨瑷宁, 杨乔, 李德生, 张和民, 邓林华, 凌珊珊, 左之才, 彭广能, 钟志军, 马晓平. 石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1449-1457.
[5]	申松玮, 王泽源, 范威峰, 祝常椿, 陆游, 石宝兰, 刘雷, 沈海峰, 焦库华, 秦涛, 陈素娟, 彭大新, 刘秀梵. 2017-2018年华东地区H9亚型禽流感病毒分离毒株的抗原差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1230-1238.
[6]	郑兰兰, 朱静静, 王盼, 舒燕, 梁青青, 李炳晓, 王超群, 魏战勇. 猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1261-1267.
[7]	秦彤, 周灵, 由欣月, 梁琳, 史利军, 张建伟, 李金祥, 崔尚金. 犬细小病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1268-1274.
[8]	范慧, 李亮, 姜平, 王先炜, 李玉峰, 白娟. 塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1312-1318.
[9]	申松玮, 王泽源, 范威峰, 祝常椿, 陆游, 石宝兰, 刘雷, 沈海峰, 焦库华, 秦涛, 陈素娟, 彭大新, 刘秀梵. 2017-2018年华东地区H9亚型禽流感病毒分离毒株的抗原差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1230-1238.
[10]	郑兰兰, 朱静静, 王盼, 舒燕, 梁青青, 李炳晓, 王超群, 魏战勇. 猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1261-1267.
[11]	秦彤, 周灵, 由欣月, 梁琳, 史利军, 张建伟, 李金祥, 崔尚金. 犬细小病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1268-1274.
[12]	范慧, 李亮, 姜平, 王先炜, 李玉峰, 白娟. 塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1312-1318.
[13]	郭紫晶, 何琪富, 汤承, 张斌, 岳华. 检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 893-900.
[14]	郭紫晶, 何琪富, 汤承, 张斌, 岳华. 检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 893-900.
[15]	何世成, 彭志, 王卫国, 唐小明, 鲁杏华, 林源, 邓国华, 王昌建. 2011-2015年环洞庭湖区H3亚型禽流感病毒的分离鉴定与遗传演化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 382-389.