畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (6): 815-822.

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口蹄疫O、Asia 1分型彩色胶乳试纸条诊断方法的建立

蒋韬,任维维,梁仲,智晓莹,祁光宇,刘湘涛,才学鹏*   

  1. 1.甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2.中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,兰州 730046;3. 中农威特生物科技股份有限公司,兰州 730046
  • 收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-06-25 发布日期:2011-06-25
  • 通讯作者: 才学鹏

  • Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-06-25 Published:2011-06-25

摘要: 为建立一种快速、简便、直观的口蹄疫O、Asia 1分型彩色胶乳免疫层析的方法,作者选择2种不同颜色的单分散胶乳,将纯化的Asia 1/China/05流行毒株兔抗体制备蓝色免疫胶乳;将纯化的O/China/99流行毒株兔抗体制备红色免疫胶乳。将2种免疫胶乳分别喷涂于不同玻璃纤维上,晾干叠加制成彩色胶乳反应垫。再分别将纯化的Asia 1/YN/BSh/58/B和AV99(L) 标准毒株的豚鼠抗体固定于同一硝酸纤维素膜的不同区域上作为2条检测带。最后组装成口蹄疫O、Asia 1分型彩色胶乳试纸条。通过对阳性参考样品的检测,结果显示试纸条有很好的灵敏度,可检测到病毒含量为3.90×104LD50;在检测与口蹄疫临床症状相似病原,如猪水泡病病毒(SVDV)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)抗原时无交叉反应,特异性好;不同批次间、同一批次内的试纸条,在检测阴、阳性参考样品时,结果完全一致,说明试纸条重复性好;试纸条对检测已知血清型的74份田间样品的符合性试验中,O型、Asia 1型样品的阳性符合率分别为95.24%、96.30%,阴性样品符合率为100%。本试验研发的口蹄疫O、Asia 1分型彩色胶乳试纸条具有很好的灵敏度、特异性、重复性和符合性,而且可以通过不同颜色进行定型检测,适合国内流行的口蹄疫病原型别的分型检测。

关键词: 口蹄疫病毒, 彩色胶乳, 免疫层析, 分型检测