基因A型鸭甲肝病毒弱毒株免疫雏鸭的8种细胞因子mRNA变化分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.06.017

摘要/Abstract

摘要：

为研究基因A型鸭甲肝病毒（DHAV-A）MY弱毒株对雏鸭细胞因子表达的影响，阐明细胞因子在DHAV-A弱毒疫苗免疫中的作用，利用荧光定量RT-PCR（RRT-PCR）方法，检测DHAV-A MY弱毒株接种1日龄SPF雏鸭后0.25、0.5、1、2、3和5 d共6个时间点肝、脾和脑组织中IFN-α、IFN-β、IFN-γ，以及IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α共8种细胞因子的mRNA转录水平，并结合各时间点DHAV-A的荷载量进行分析。结果表明：肝和脑组织中2 d时间点以及脾组织中3 d时间点病毒荷载量达到最高；三种组织中，8种细胞因子的转录水平均随着病毒荷载量的增加而升高，且在各组织病毒荷载量最高时间点，8种细胞因子的转录水平均极显著升高（P<0.01），结果证明DHAV-A MY弱毒株可刺激雏鸭抗病毒细胞因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α以及炎性细胞因子IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8 mRNA的转录，本研究丰富了DHAV-A MY弱毒株的免疫机制。

关键词: 基因A型鸭甲肝病毒, 弱毒株, 细胞因子, 荧光定量RT-PCR

Abstract:

In order to explore the roles of cytokines responding to attenuated duck hepatitis A virus genotype A (DHAV-A) vaccine immunization，the effects of attenuated DHAV-A MY strain on cytokine transcription in ducklings were analyzed.The mRNA transcription levels of 8 cytokines，such as IFN-α，IFN-β，IFN-γ and IL-1β，IL-2，IL-6，IL-8，and TNF-α，were determined by RRT-PCR in liver，spleen and brain of ducklings at different time points of 0.25 0.5，1，2，3 and 5 days post attenuated DHAV-A MY strain injecting 1-day-old SPF ducklings，and the virus loads of DHAV-A MY strain in liver，spleen and brain were also detected by RRT-PCR.The results indicated that the virus load reached the highest level in liver and brain at 2 d time point，and at 3 d time point in spleen post attenuated DHAV-A MY strain injection.The mRNA transcription levels of 8 cytokines in liver，spleen and brain up-regulated very significantly at the corresponding time points when the virus load reached the highest level post DHAV-A MY strain injection (P<0.01).The results indicated that attenuated DHAV-A MY strain could stimulate the transcription of anti-viral cytokines IFN-α，IFN-β，IFN-γ and TNF-α，as well as proinflammatory cytokines IL-1β，IL-2，IL-6 and IL-8，our results enrich the immunization mechanism of DHAV-A MY strain.

Key words: duck hepatitis A virus genotype A, attenuated strain, cytokine, RRT-PCR

中图分类号:

S855.3

张焕容，张冰，王栋，岳华. 基因A型鸭甲肝病毒弱毒株免疫雏鸭的8种细胞因子mRNA变化分析[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(6): 1215-1221.

ZHANG Huan-rong，ZHANG Bing，WANG Dong，YUE Hua. mRNA Change Analysis of Eight Cytokines in Ducklings Stimulated by Attenuated Duck Hepatitis A Virus Genotype A MY Strain[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(6): 1215-1221.

参考文献

［1］GU C Q，XIE C Q，HU X Y，et al.Cytokine gene expression in the livers of ducklings infected with duck hepatitis virus-1 JX strain ［J］.Poult Sci，2012，91(3)：583-591.
［2］窦永喜，景志忠，才学鹏.细胞因子及其应用的研究进展［J］.中国兽医科技，2005，35(3)：233-238.
DOU Y X，JING Z Z，CAI X P.Research progress of cytokines and their application ［J］.Chinese Journal of Veterinary Science and Technology，2005，35(3)：233-238.(in Chinese)
［3］THAKUR A，PEDERSEN L E，JUNGERSEN G.Immune markers and correlates of protection for vaccine induced immune responses ［J］.Vaccine，2012，30(33)：4907-4920.
［4］KUMAR V，SHARMA A.Neutrophils：Cinderella of innate immune system ［J］.Int Immunopharmacol，2010，10(11)：1325-1334.
［5］SCHULTZ U，CHISARI F V.Recombinant duck interferon gamma inhibits duck hepatitis B virus replication in primary hepatocytes ［J］.J Virol，1999，73(4)：3162-3168.
［6］黄秋雪，汤承，聂培婷，等.鸭甲肝病毒基因 A 型和 C 型双重 RT-PCR 检测方法的建立［J］.中国预防兽医学报，2012，34(2)：120-123.
HUANG Q X，TANG C，NIE P T，et al.Establishment of a duplex RT-PCR assay for detection of duck hepatitis A virus genotype A and genotype C ［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2012，34(2)：120-123.(in Chinese)
［7］杨发龙，谢秀兰，汤承，等.鸭瘟病毒疫苗株与强毒株诱导雏鸭 IFN-α mRNA 在肝脏中表达的动态定量研究［J］.中国预防兽医学报，2008，30(8)：647-650.
YANG F L，XIE X L，TANG C，et al.Dynamics of IFN-α mRNA expression in liver of ducks infected with duck plague virus of different virulence ［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2008，30(8)：647-650.(in Chinese)
［8］ADAMS S C，XING Z，LI J，et al.Immune-related gene expression in response to H11N9 low pathogenic avian influenza virus infection in chicken and Pekin duck peripheral blood mononuclear cells ［J］.Mol Immunol，2009，46(8-9)：1744-1749.
［9］谢秀兰，汤承，杨发龙，等.鸭 IFN-γ mRNA 实时荧光定量 RT-PCR 方法的建立［J］.动物医学进展，2008，29(5)：17-20.
XIE X L，TANG C，YANG F L，et al.Establishment of real-time RT-PCR for IFN-γ mRNA in duck［J］.Progress in Veterinary Medicine，2008，29(5)：17-20.(in Chinese)
［10］谢秀兰，杨发龙，岳华，等.鸭 β-actin 基因实时荧光定量 PCR 方法的建立［J］.西南民族大学学报(自然科学版)，2008 (S1)：57-60.
XIE X L，YANG F L，YUE H，et al.Establishment of real-time PCR for β-actin gene of duck［J］.Journal of Southwest University for Nationalities (Natural Science Edition)，2008(S1)：57-60.(in Chinese)
［11］杨苗.实时荧光定量 RT-PCR 检测1型鸭病毒性肝炎方法的建立和应用［D］.成都：四川农业大学，2009.
YANG M.Development and application of a one-step real-time TaqMan RT-PCR assay to detect duck hepatitis virus type 1 ［D］.Chengdu：Sichuan Agricultural University，2009.(in Chinese)
［12］汪铭书，程安春，陈孝跃.鸭病毒性肝炎的研究：弱毒在雏鸭和成年鸭体内分布和排泄［J］.中国畜禽传染病，1997(4)：11-15.
WANG M S，CHENG A C，CHEN X Y.Research of duck viral hepatitis：distribution and excrement of attenuated duck hepatitis virus in ducks ［J］.Journal of Chinese Livestock and Poultry Infectious Diseases，1997(4)：11-15.(in Chinese)
［13］程安春，汪铭书，崔恒敏，等.鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 1.最佳配比的筛选、安全性及免疫效力［J］.畜牧兽医学报，1996，27(5)：466-474.
CHENG A C，WANG M S，CUI H M，et al.Study on bivalent attenuated vaccines against duck plague and duck viral hepatitis 1.The most appropriate proportion，safety and immune efficacy test ［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，1996，27(5)：466-474.(in Chinese)
［14］郭智莉.DHV-Ⅰ对鸭巨噬细胞 TLRs 信号通路的影响［D］.重庆：西南大学，2012.
GUO Z L.The effect of DHV-I on TLRs signaling pathway in duck macrophages［D］.Chongqing：Southwest University，2012.(in Chinese)
［15］SONG C，YU S，DUAN Y，et al.Effect of age on the pathogenesis of DHV-1 in Pekin ducks and on the innate immune responses of ducks to infection［J］.Arch Virol，2014，159(5)：905-914.

[1]	俞演, 古玉, 王承东, 胡静, 杨瑷宁, 杨乔, 李德生, 张和民, 邓林华, 凌珊珊, 左之才, 彭广能, 钟志军, 马晓平. 石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1449-1457.
[2]	俞演, 古玉, 王承东, 胡静, 杨瑷宁, 杨乔, 李德生, 张和民, 邓林华, 凌珊珊, 左之才, 彭广能, 钟志军, 马晓平. 石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1449-1457.
[3]	郑兰兰, 朱静静, 王盼, 舒燕, 梁青青, 李炳晓, 王超群, 魏战勇. 猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1261-1267.
[4]	郑兰兰, 朱静静, 王盼, 舒燕, 梁青青, 李炳晓, 王超群, 魏战勇. 猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1261-1267.
[5]	郭紫晶, 何琪富, 汤承, 张斌, 岳华. 检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 893-900.
[6]	郭紫晶, 何琪富, 汤承, 张斌, 岳华. 检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 893-900.
[7]	段世豪, 路建彪, 李旭勇, 刘成, 张树金, 殷国政, 司振书, 李玉保. 鸡马立克病肝组织肿瘤病变与热休克蛋白转录、表达的相关性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 415-421.
[8]	李闻, 马思续, 李想通, 孙杨杨, 魏凤灵, 许瑞勤, 杨国宇, 夏平安, 张改平. PRRSV VR2332弱毒株经滴鼻、注射途径接种仔猪的病毒血症和抗体产生的差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 373-381.
[9]	李闻, 马思续, 李想通, 孙杨杨, 魏凤灵, 许瑞勤, 杨国宇, 夏平安, 张改平. PRRSV VR2332弱毒株经滴鼻、注射途径接种仔猪的病毒血症和抗体产生的差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 373-381.
[10]	段世豪, 路建彪, 李旭勇, 刘成, 张树金, 殷国政, 司振书, 李玉保. 鸡马立克病肝组织肿瘤病变与热休克蛋白转录、表达的相关性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 415-421.
[11]	杨伟, 韦冠东, 汤德元, 曾智勇, 黄涛, 王彬, 胡玲玲, 龙冬梅, 黄秋涵, 廖晓糠, 田红宇. 日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4⁺T细胞应答的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(8): 1693-1700.
[12]	杨伟, 韦冠东, 汤德元, 曾智勇, 黄涛, 王彬, 胡玲玲, 龙冬梅, 黄秋涵, 廖晓糠, 田红宇. 日本乙型脑炎病毒强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-NS2A诱导小鼠CD4⁺T细胞应答的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(8): 1693-1700.
[13]	朱玉东, 汪铭书, 程安春, 朱德康, 贾仁勇, 刘马峰, 陈舜, 赵新新, 杨乔, 吴英, 陈孝跃. 鸭甲肝病毒3型在人工感染雏鸭体内分布与诱导肝病变及细胞因子表达的关联性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(1): 164-172.
[14]	朱玉东, 汪铭书, 程安春, 朱德康, 贾仁勇, 刘马峰, 陈舜, 赵新新, 杨乔, 吴英, 陈孝跃. 鸭甲肝病毒3型在人工感染雏鸭体内分布与诱导肝病变及细胞因子表达的关联性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(1): 164-172.
[15]	刘宽辉, 田卫军, 高珍珍, 候冉冉, 岳婵娟, 王德云, 刘家国, 武毅, 胡元亮. 硒化党参多糖和大蒜多糖协同增强鸡外周血淋巴细胞和新城疫疫苗的免疫功效[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(7): 1349-1356.