β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.012

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (5): 768-773.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.012

β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响

刘丹丹，赵元^*，韩蕊，张诗尧

（吉林农业大学动物科技学院，动物生产及产品质量安全教育部重点实验室，吉林省动物营养与饲料科学重点实验室，长春130118）

收稿日期:2014-07-08 出版日期:2015-05-23 发布日期:2015-05-19
通讯作者: 赵元，博士，副教授，E-mail：zhaoyuan4CL52@126.com
作者简介:刘丹丹（1988-），女，吉林松原人，硕士生，主要从事饲料抗营养因子研究，E-mail：ddliu19880922@163.com
基金资助:
国家自然科学基金青年资金项目（31101719）；省科技发展计划项目青年科研基金（201201098）；吉林省教育厅“十二五”科学技术研究规划项目

Effects of β-conglycinin Hydrolyzed Peptide on the Permeability and Expression of Tight Junction Protein in Piglet Intestinal Epithelial Cells

LIU Dan-dan，ZHAO Yuan^*，HAN Rui，ZHANG Shi-yao

（Key Laboratory of Animal Production，Product Quality and Security of Ministry of Education，Key Laboratory of Animal Nutrition and Feeds Science in Jilin Province，College of Animal Science and Technology，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China）

Received:2014-07-08 Online:2015-05-23 Published:2015-05-19

摘要/Abstract

摘要：

本研究通过测定大豆抗原β-Conglycinin酶解肽（52 ku）对仔猪空肠上皮细胞（IPEC）通透性及紧密连接蛋白Occludin与ZO-1 基因mRNA表达的影响，为探索其对肠道损伤的相关机制提供依据。本试验分别采用不同浓度（0、0.125、0.25、0.5、1、2 mg•mL^-1）52 ku酶解肽处理IPEC 2、4、6、8、12、24 h后，通过测定细胞存活力（MTT值）、跨上皮细胞电阻值（TEER）以及细胞培养液中碱性磷酸酶（AP）的活性，检测52 ku酶解肽对细胞膜通透性的影响。并选取0.5 mg•mL^-1 52 ku酶解肽处理IPEC 24 h后，用实时荧光定量PCR方法检测Occludin与ZO-1基因 mRNA表达量的变化情况。结果表明，52 ku酶解肽处理仔猪空肠上皮细胞后，MTT值和TEER呈时间-剂量依赖性降低（P<0.05）。24 h处理后，AP活性呈显著升高趋势（P<0.05）。与对照组相比，52 ku酶解肽可使Occludin和ZO-1 基因mRNA相对表达量均呈显著下降趋势（P<0.05）。总之，52 ku酶解肽使仔猪空肠上皮细胞通透性增加，并降低Occludin 或ZO-1的 mRNA表达。

关键词: 大豆抗原&beta, -Conglycinin, 52 ku酶解肽, 仔猪, IPEC, 紧密连接

Abstract:

The objective of this study was to evaluate the effects of β-Conglycinin hydrolyzed peptide（52 ku） on the permeability and expression of tight junction protein Occludin and ZO-1 in piglet intestinal epithelial cells（IPEC），which would provide a basis for exploring the mechanisms of intestinal damage.IPEC were treated with different concentrations（0，0.125，0.25，0.5，1 and 2 mg•mL^-1） hydrolyzed peptide for 2，4，6，8，12，24 h.The effects of hydrolyzed peptide（52 ku） on cell membrane permeability were determined by measuring the cell viability（MTT values），transepithelial resistance values（TEER） and alkaline phosphatase（AP） activity in cell culture medium.The mRNA expression of Occludin and ZO-1 were detected by real-time PCR after IPEC treated with 0.5 mg•mL^-1 hydrolyzed peptide for 24 h.The results showed that MTT and TEER of intestinal epithelial cells treated with hydrolyzed peptide（52 ku） with 0.5 mg•mL^-1 were decreased by a time-dose dependent manner（P<0.05）.With the increase concentration of hydrolyzed peptide（52 ku），AP activity in 24 h treatment group had a significant increased trend（P<0.05） by dose dependent manner.Also，hydrolyzed peptide（52 ku） could decrease the relative expression of Occludin and ZO-1 mRNA in IPEC（P<0.05）.In conclusion，hydrolyzed peptide（52 ku） destructed the permeability and reduced Occludin or ZO-1 mRNA expression of tight junction protein in IPEC.

Key words: soybean allergic β-Conglycinin, 52 ku hydrolyzed peptide, piglets, IPEC, tight junctions

中图分类号:

S828
S815.4

刘丹丹，赵元，韩蕊，张诗尧. β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(5): 768-773.

LIU Dan-dan，ZHAO Yuan，HAN Rui，ZHANG Shi-yao. Effects of β-conglycinin Hydrolyzed Peptide on the Permeability and Expression of Tight Junction Protein in Piglet Intestinal Epithelial Cells[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(5): 768-773.

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β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响

Effects of β-conglycinin Hydrolyzed Peptide on the Permeability and Expression of Tight Junction Protein in Piglet Intestinal Epithelial Cells

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