猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.07.025

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (7): 1202-1206.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.07.025

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猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析

李彦伟^1，2，刘茂军^1*，刘蓓蓓¹，武昱孜¹，倪博¹，白方方¹，纪燕³，张映²，邵国青^1*

(1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014；2.山西农业大学，太谷 030801；3.南京农业大学动物医学院，南京 210095)

收稿日期:2013-11-14 出版日期:2014-07-23 发布日期:2014-07-21
通讯作者: 邵国青（1964-），江苏建湖人，研究员，主要从事动物传染病诊断与防控研究，E-mail：gqshaojaas@gmail.com；刘茂军（1977-），副研究员，主要从事猪病诊断与防控研究，E-mail：maojunliu@163.com
作者简介:李彦伟（1986-），男，山西大同人，硕士，主要从事生物化学与分子生物学研究，E-mail：sxliyanwei@sina.cn
基金资助:
国家自然科学基金(31100136)；江苏省农业科技自主创新资金［CX(12)5051］

Analysis of Epithelial Cell Oxidative Damage Induced by Mycoplasma hyopneumoniae

LI Yan-wei^1，2，LIU Mao-jun^1*，LIU Bei-bei¹，WU Yu-zi¹，NI Bo¹，BAI Fang-fang¹，JI Yan³，ZHANG Ying²，SHAO Guo-qing^1*

(1.Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology of Ministry of Agriculture，National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products，Institute of Veterinary Medicine，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014， China；2.Shanxi Agricultural University，Taigu 030801， China; 3.College of Veterinary Medicine，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095， China)

Received:2013-11-14 Online:2014-07-23 Published:2014-07-21

摘要/Abstract

摘要：

分析猪肺炎支原体致病株168和弱毒株168L对上皮细胞的氧化损伤。用猪肺炎支原体168和168L株体外感染猪肺泡上皮细胞（SJPL），通过对感染细胞进行MTT和NO检测，筛选感染时间和感染剂量，利用间接免疫荧光（IFA）检测细胞上Mhp，通过H₂O₂和DAPI验证细胞损伤。结果：在5×10⁶CCU感染36 h时，细胞活力相同，Mhp168株感染细胞的NO浓度显著高于Mhp168L株（P＜0.05）；H2O2检测显示Mhp168对细胞的氧化损伤显著高于Mhp168L株，同时都显著高于对照（P＜0.01）；IFA观察分析显示Mhp168株在细胞上的黏附量高于Mhp168L。DAPI染色显示Mhp168对细胞造成的损伤程度高于Mhp168L。通过优化感染时间和感染剂量，找到了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞损伤的显著差异点，分析了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞的氧化损伤，为深入研究猪肺炎支原体强弱毒株感染细胞的差异机制奠定了基础。

关键词: 猪肺炎支原体, 感染, 上皮细胞, 氧化损伤

Abstract:

The study was conducted to analyse an epithelial cell oxidative damage of a pathogenic Mycoplasma hyopneumoniae strain 168 and attenuated strains 168L in vitro.M.hyopneumoniae strain 168 and its attenuated strain 168L were used to infect the swine alveolar epithelial cells (SJPL) in vitro.To determine an appropriate time of infection and infection dosage，both nitrogen monoxide (NO) from the supernatant of the infected cell and 3-(4,5Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) were measured.To verify the injury model，an indirect immunofluorescence (IFA) was used to detect the Mhp on the cell，cell damage were evaluated by detecting the hydrogen peroxide (H₂O₂) and 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI).Results were as follows：The optimizing infection time is 36 h post-infection and the infectious dosage is 5×10⁶CCU.The NO in the supernatants of the infected cells was significantly higher in the infected cells by Mhp168 compared to Mhp168L strains (P<0.05) in the same cell viability.The H₂O₂ detection shows that Mhp168 and Mhp168L oxidative damage to cells was significantly higher than the control (P <0.01).It also demonstrated a significant differences (P <0.05) in oxidative damage between Mhp168 and Mhp168L infected cells.The results of IFA and DAPI showed that the Mhp168 adhered to cells exceed that of Mhp168L and the extent of damage to cells is also larger.The analysis of oxidative damage of SJPL cells infected by Mhp in vitro offers a basis for the further study of the infection mechanism of different Mhp strains to cell.

Key words: Mycoplasma hyopneumoniae, infection, epithelial cells, oxidative damage

中图分类号:

S852.62

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LI Yan-wei，LIU Mao-jun，LIU Bei-bei，WU Yu-zi，NI Bo，BAI Fang-fang，JI Yan，ZHANG Ying，SHAO Guo-qing. Analysis of Epithelial Cell Oxidative Damage Induced by Mycoplasma hyopneumoniae[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(7): 1202-1206.

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