羊驼TGF-β1基因的克隆及表达分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.005

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (6): 885-892.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.005

羊驼TGF-β1基因的克隆及表达分析

贾小云¹，金雷皓¹，丁娜¹，罗东萍²，范瑞文³，董常生^3*

(1.山西农业大学生命科学学院，太谷 030801； 2.山西医科大学第一临床医学院风湿免疫科，太原 030001；3.山西农业大学动物科技学院，太谷 030801)

收稿日期:2013-12-27 出版日期:2014-06-23 发布日期:2014-06-23
通讯作者: 董常生，教授，博士生导师，E-mail:cs_dong@sxau.edu.cn
作者简介:贾小云（1976-），女，山西柳林人，副教授，博士，主要从事miRNA作用机理研究， E-mail：gssjxy@hotmail.com；金雷皓与贾小云为并列第一作者
基金资助:
教育部高等学校博士学科点专项科研基金（20111403120006）；中国博士后科学基金普通资助和特别资助（20100481306；2012T50246）；博士后经费（83557）；山西省留学基金（2011051）；山西人才引进与开发专项（614191）；山西省高等学校131人才；山西农业大学中青年学术骨干

Cloning and Expression of TGF-β1 Gene from Alpaca (Lama pacos)

JIA Xiao-yun¹，JIN Lei-hao¹，DING Na¹，LUO Dong-ping²，FAN Rui-wen³，DONG Chang-sheng^3*

(1.College of Life Science，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801， China；2.The First Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001， China；3.College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801， China)

Received:2013-12-27 Online:2014-06-23 Published:2014-06-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在克隆羊驼TGF-β1基因，了解TGF-β1序列特征及其在不同组织中的表达特征，寻找TGF-β1基因的mRNA表达量与毛色之间的相关性，为研究TGF-β1基因的生物学功能提供基础。以羊驼为材料，利用3′和5′RACE技术克隆羊驼TGF-β1基因，利用DNAman、PROSITE和megAlign软件分别分析序列特征和相似性，应用荧光定量PCR （qRT-PCR）分析TGF-β1基因在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达及TGF-β1在山羊不同组织中的表达特异性。结果表明，羊驼TGF-β1 cDNA克隆全长为1 364 bp（GenBank登录号：KF887499），ORF长1 173 bp，编码390个氨基酸。氨基酸序列分析显示，羊驼TGF-β1具有其家族的典型结构特征，与其他哺乳动物相似性很高，与野猪的亲缘关系最近。羊驼TGF-β1 基因在棕色羊驼皮肤组织中的表达量是白色羊驼皮肤组织的3.5倍。组织特异性分析表明，TGF-β1在山羊不同组织中均有表达，且在淋巴组织中表达量相对最高。羊驼TGF-β1 全长cDNA的克隆和不同组织器官TGF-β1基因表达分析显示，TGF-β1与羊驼毛色形成密切相关。本研究为深入探讨TGF-β1参与动物毛色形成及调控的分子机制奠定了基础。

关键词: 羊驼, TGF-&beta, 1基因, cDNA 末端快速扩增, qRT-PCR, 表达分析

Abstract:

In order to explore the biological functions of TGF-β1 in coat color formation in alpaca,the experiment was conducted to clone alpaca TGF-β1 gene，investigate the expression of TGF-β1 in different tissues/organs，and examine the relationship between the TGF-β1 expression and alpaca coat color.The TGF-β1 cDNA was cloned from alpaca by 3′ and 5′ RACE.The sequence analysis was performed by DNAman，PROSITE and megAlign.The expression levels of TGF-β1 gene in different organs/tissues were analyzed by qRT-PCR.The full length of TGF-β1 cDNA in alpaca was 1 364 bp (GenBank Accession No.KF887499) with 1 173 bp ORF coding 390 amino acids.Sequence analysis showed alpaca TGF-β1 has typical structures of TGF-β1 family，showing high similarity with responsed proteins from other mammals.Phylogenetic analysis showed that alpaca TGF-β1 gene is much closed to wild boar(Sus scrofa).qRT-PCR showed that the relative gene expression level of TGF-β1 in brown alpaca was 3.5 times than that in white alpaca.TGF-β1 gene was expressed widely in tested tissues in goat while the expression levels were different in those tissues and highest in lymphoid tissue.Cloning and sequence characterization of alpaca TGF-β1 gene plus the expression analysis in different tisssues/organs indicate that TGF-β1 may play important role in alpaca coat color formation，provide the related DNA elements and experimental basic for further investigating on the molecular mechanism of TGF-β1 functions in animal coat color formation and regulation.

Key words: alpaca, TGF-β1 gene, rapid amplification of cDNA ends (RACE), qRT-PCR, expression analysis

中图分类号:

S813.3

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羊驼TGF-β1基因的克隆及表达分析

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