黄鳝胃瘤线虫ITS及5.8 S rDNA的克隆及序列分析

畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (3): 453-459.

黄鳝胃瘤线虫ITS及5.8 S rDNA的克隆及序列分析

段柳春1,刘伟1,徐平源2,何鑫1,周小军1,刘智连1,郑艳琼1,刘毅1*

1.湖南农业大学动物医学院，长沙 410128； 2.湖南生物机电职业技术学院，长沙 410128

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-03-28 发布日期:2012-03-28
通讯作者: 刘毅

Cloning and Sequence Analysis of the ITS and 5.8 S rDNA of Larval Eustrongylides spp. Isolates from Monopterus albus (zuiew)

DUAN Liuchun1，LIU Wei1，XU Pingyuan2，HE Xin1，ZHOU Xiaojun1，
LIU Zhilian1，ZHENG Yanqiong1，LIU Yi1*

1.College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, Changsha 410128，China；2. Hunan Biological Electromechanical Vocational Technical College, Changsha 410128，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2012-03-28 Published:2012-03-28
Contact: LIU Yi

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在阐明黄鳝胃瘤线虫湖南分离株的核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)及5.8 S rDNA序列的遗传变异情况，并用ITS序列重构胃瘤线虫与其它线虫的种群遗传关系。利用聚合酶链反应(PCR)扩增胃瘤线虫rDNA的ITS1、5.8 S及ITS2片段，将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEMT Easy载体，重组质粒通过菌落PCR鉴定后，对阳性菌落进行序列测定并进行序列分析。结果显示所获得的胃瘤线虫ITS及5.8 S rDNA序列总长存在一定差异(922~927 bp)，其中包含部分的18 S、28 S及全部的ITS1 (350~351 bp)、5.8S（102 bp) 及ITS2 (340~344 bp) 序列。本研究系国内首次报道胃瘤线虫的ITS序列，其结果为黄鳝胃瘤线虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定了基础。

关键词: 黄鳝, 胃瘤线虫, 内转录间隔区(ITS), 序列分析, 种系发育关系

Abstract: The objectives of the present study were to examine sequence variation in the internal transcribed spacer (ITS) and 5.8S rDNA of Eustrongylides spp. isolates from Monopterus albus, and to reconstruct their phylogenetic relationship using ITS sequences. The ITS sequences were amplified from each Eustrongylides spp. samples and the amplicons were cloned into pGEMT Easy vector, respectively. The inserts were successfully sequenced, and the length of ITS in 32 Eustrongylides spp. isolates were different（922927 bp）. Sequence analysis revealed that the ITS1, 5.8S and ITS2 rDNA of these samples were 350351 bp, 102 bp and 340344 bp in length, respectively. The results indicate that the ITS sequences provide useful genetic marker for molecular identification of Eustrongylides spp. It was the first time that the complete sequence of ITS and 5.8 S rDNA of Eustrongylides spp. were reported. The results of this study lay down the foundation for further study on molecular epidemiology and diagnostics of Eustrongylides spp.

Key words: Monopterus albus, Eustrongylides spp., internal transcribed spacer, sequence analysis, phylogenetic relationship

段柳春;刘伟;徐平源;何鑫;周小军;刘智连;郑艳琼;刘毅. 黄鳝胃瘤线虫ITS及5.8 S rDNA的克隆及序列分析[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(3): 453-459.

DUAN Liuchun;LIU Wei;XU Pingyuan;HE Xin;ZHOU Xiaojun;LIU Zhilian;ZHENG Yanqiong;LIU Yi. Cloning and Sequence Analysis of the ITS and 5.8 S rDNA of Larval Eustrongylides spp. Isolates from Monopterus albus (zuiew)[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2012, 43(3): 453-459.

[1]	邱静静, 丁轲, 余祖华, 贾艳艳, 张春杰, 汪洋, 赵战勤. 2014-2017年河南省副猪嗜血杆菌分离菌株的PCR鉴定及分型[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1649-1657.
[2]	邱静静, 丁轲, 余祖华, 贾艳艳, 张春杰, 汪洋, 赵战勤. 2014-2017年河南省副猪嗜血杆菌分离菌株的PCR鉴定及分型[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1649-1657.
[3]	申松玮, 王泽源, 范威峰, 祝常椿, 陆游, 石宝兰, 刘雷, 沈海峰, 焦库华, 秦涛, 陈素娟, 彭大新, 刘秀梵. 2017-2018年华东地区H9亚型禽流感病毒分离毒株的抗原差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1230-1238.
[4]	申松玮, 王泽源, 范威峰, 祝常椿, 陆游, 石宝兰, 刘雷, 沈海峰, 焦库华, 秦涛, 陈素娟, 彭大新, 刘秀梵. 2017-2018年华东地区H9亚型禽流感病毒分离毒株的抗原差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1230-1238.
[5]	刘琪, 史利军, 梁琳, 张玲玲, 袁维峰, 梁瑞英, 李金祥, 崔尚金. 一株猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其VP2和NS1基因的变异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1106-1112.
[6]	刘琪, 史利军, 梁琳, 张玲玲, 袁维峰, 梁瑞英, 李金祥, 崔尚金. 一株猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其VP2和NS1基因的变异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1106-1112.
[7]	杨振兴, 孟锦昕, 肖雷, 朱建波, 廖德芳, 高林, 李占鸿, 杨恒, 李华春. 流行性出血病病毒(EHDV)血清7型毒株在中国的首次分离与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 602-610.
[8]	杨振兴, 孟锦昕, 肖雷, 朱建波, 廖德芳, 高林, 李占鸿, 杨恒, 李华春. 流行性出血病病毒(EHDV)血清7型毒株在中国的首次分离与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 602-610.
[9]	李占鸿, 王金萍, 杨恒, 廖德芳, 宋建领, 高林, 何于雯, 李华春. 蓝舌病病毒血清9型毒株在我国的首次分离[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 354-363.
[10]	李占鸿, 王金萍, 杨恒, 廖德芳, 宋建领, 高林, 何于雯, 李华春. 蓝舌病病毒血清9型毒株在我国的首次分离[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 354-363.
[11]	潘耀谦, 孔令芸, 李鹏, 岳峰, 吴玉平, 刘兴友. 一种新型无钩豆状囊尾蚴的鉴定和18S DNA序列分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(11): 2283-2289.
[12]	季程远, 王蔚怡, 冯选榕, 姚静, 黄欣, 冯园青, 覃一峰, 方庆励, 陈樱, 欧阳康, 韦祖樟, 黄伟坚. 广西某市屠宰猪淋巴结猪圆环病毒3型的病原检测及遗传演化分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(6): 1265-1273.
[13]	季程远, 王蔚怡, 冯选榕, 姚静, 黄欣, 冯园青, 覃一峰, 方庆励, 陈樱, 欧阳康, 韦祖樟, 黄伟坚. 广西某市屠宰猪淋巴结猪圆环病毒3型的病原检测及遗传演化分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(6): 1265-1273.
[14]	杨恒, 肖雷, 李占鸿, 孟锦昕, 杨振兴, 吕敏娜, 林栩慧, 廖德芳, 牛保生, 李华春. 2012—2016年中国南方地区帕利亚姆血清群病毒的分离与序列特征分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(4): 761-770.
[15]	杨恒, 肖雷, 李占鸿, 孟锦昕, 杨振兴, 吕敏娜, 林栩慧, 廖德芳, 牛保生, 李华春. 2012—2016年中国南方地区帕利亚姆血清群病毒的分离与序列特征分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(4): 761-770.