猪戊型肝炎病毒Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (6): 950-955.

猪戊型肝炎病毒Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

赵菲菲¹，赵钦²，胡守彬¹，陈福勇³，肖一红^1*，周恩民^2*

1. 山东农业大学动物科技学院免疫生物学实验室，泰安 271018； 2. 西北农林科技大学兽医免疫学研究所，西北农林科技大学动物医学院，杨凌 712100； 3. 中国农业大学动物医学院，北京 100193

收稿日期:2011-11-17 出版日期:2012-06-25 发布日期:2012-06-25
通讯作者: 肖一红，周恩民
作者简介:赵菲菲（1987-），女山东东营人，硕士生，主要从事戊型肝炎研究，E-mail：bn86001@163.com
基金资助:
山东省“泰山学者”建设工程项目（040-72010）

Preparation and Characterization of Monoclonal Antibodies Specific for Capsid Protein of Swine Hepatitis E Virus Genotype Ⅳ

ZHAO Fei-fei¹, ZHAO Qin², HU Shou-bin¹, CHEN Fu-yong³, XIAO Yi-hong^1*, ZHOU En-min^2*

1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, TaiAn 271018, China；2. Veterinary Immunology Research Institute of Northwest A & F University, College of Veterinary Medicine, Northwest A & F University, Yangling 712100, China; 3. College of Veterinary Medicine, China Agricultyral University, Beijing 100193, China

Received:2011-11-17 Online:2012-06-25 Published:2012-06-25
Contact: XIAO Yihong1*,

摘要/Abstract

摘要：

为获得猪戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus, HEV) Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体，将猪HEV衣壳蛋白的C端267(408—675)个氨基酸基因序列克隆入原核表达载体pET-28a(+)，构建重组质粒pET-28a-ORF2-C，转化E. coli Rosetta ( BL21)感受态细胞进行诱导表达，SDS-PAGE和Western blot鉴定，纯化后免疫小鼠。取免疫小鼠的脾脏与鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合制备单克隆抗体。通过间接ELISA和竞争ELISA方法筛选并鉴定单抗。结果表明蛋白得到正确、高效表达，获得3株识别不同的抗原表位区的单克隆抗体，分别命名为Mab-1E4 (IgG1)、Mab-2C7 (IgG1)和Mab-2G9 (IgG2b)，其中1E4和2G9能阻断临床阳性猪血清，提示该2株单克隆抗体识别的抗原表位是猪HEV Ⅳ型衣壳蛋白上重要的抗原表位区，而单抗Mab-2C7不能阻断。本研究为猪HEV Ⅳ型的诊断及研究提供重要工具。

关键词: 猪戊型肝炎病毒, 衣壳蛋白, 单克隆抗体, 鉴定

Abstract:

To prepare monoclonal antibodies (Mabs) against capsid protein of swine hepatitis E virus Ⅳ (HEV), the gene of swine HEV encoding Cterminal 267 (408-675) amino acids of capsid protein was cloned into pET-28a (+) vector to construct recombinant plasmid pET-28a-ORF2-C. The protein was expressed in E. coli Rosetta (BL21), and identified by SDS-PAGE and Western blot. Spleens of BALB/c mice immunized with the purified protein were used to produce monoclonal antibodies (Mabs). The Mabs were selected and characterized with the indirect ELISA and competitive ELISA. Protein was expressed correctly. Three Mabs, designated Mab-2C7, 2G9 and 1E4, were selected and recognized three independent epitopes. Mab-2G9 is IgG2b and Mab-2C7 and Mab-1E4 are IgG1. The positive HEV swine sera could be blocked by Mab-1E4 and Mab-2G9 indicating the epitopes recognized by Mab-1E4 and Mab-2G9 are predominant epitopes in capsid protein of swine HEV genotype Ⅳwhile Mab-2C7 can not. The results suggest that the Mab-1E4 and Mab-2G9 are potential diagnostic reagents for detection of swine HEV infection genotype Ⅳ.

Key words: swine hepatitis E virus, capsid protein, monoclonal antibodies, identification

中图分类号:

S8523.659.6

赵菲菲;赵钦;胡守彬;陈福勇;肖一红;周恩民. 猪戊型肝炎病毒Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(6): 950-955.

ZHAO Fei-fei;ZHAO Qin;HU Shou-bin;CHEN Fu-yong;XIAO Yi-hong;ZHOU En-min. Preparation and Characterization of Monoclonal Antibodies Specific for Capsid Protein of Swine Hepatitis E Virus Genotype Ⅳ[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2012, 43(6): 950-955.

[1]	康浩然, 刘重阳, 于勇, 张俊杰, 潘子豪, 姚火春. 2017-2018年我国部分地区牛支原体的分离鉴定及多位点序列分型[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1857-1863.
[2]	王盼举, 樊新丽, 张梦圆, 宋晶晶, 李敏, 吾力江, 巴音查汗. 地方株马驽巴贝斯虫Bc48截短体单克隆抗体的制备及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1882-1887.
[3]	马玉俊, 张凯, 王磊, 张康, 张宏, 王学智, 李杰, 梁子敬, 张景艳, 李建喜. 白蚁肠道纤维素降解菌的分离和鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1951-1954.
[4]	牛凯, 程汝佳, 许冠龙, 冯宇, 孙石静, 范学政, 彭小薇, 朱良全, 秦玉明, 丁家波, 常维山, 蒋卉. 一株鹿源牛种布鲁菌的鉴定及全基因组分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1666-1675.
[5]	牛凯, 程汝佳, 许冠龙, 冯宇, 孙石静, 范学政, 彭小薇, 朱良全, 秦玉明, 丁家波, 常维山, 蒋卉. 一株鹿源牛种布鲁菌的鉴定及全基因组分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1666-1675.
[6]	唐泽群, 罗海燕, 葛铭, 郭荣, 许丹蕾, 张瑞莉. 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1292-1300.
[7]	唐泽群, 罗海燕, 葛铭, 郭荣, 许丹蕾, 张瑞莉. 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1292-1300.
[8]	刘琪, 史利军, 梁琳, 张玲玲, 袁维峰, 梁瑞英, 李金祥, 崔尚金. 一株猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其VP2和NS1基因的变异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1106-1112.
[9]	刘琪, 史利军, 梁琳, 张玲玲, 袁维峰, 梁瑞英, 李金祥, 崔尚金. 一株猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其VP2和NS1基因的变异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1106-1112.
[10]	吕天星, 李松建, 郝永清. 鉴别显色培养基在奶牛乳房炎病原菌快速鉴定中的应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 851-860.
[11]	吕天星, 李松建, 郝永清. 鉴别显色培养基在奶牛乳房炎病原菌快速鉴定中的应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 851-860.
[12]	李然, 汤承, 罗雪, 岳华. 一株牦牛源G6P[11]型牛轮状病毒的分离鉴定及部分基因的序列分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 592-601.
[13]	杨振兴, 孟锦昕, 肖雷, 朱建波, 廖德芳, 高林, 李占鸿, 杨恒, 李华春. 流行性出血病病毒(EHDV)血清7型毒株在中国的首次分离与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 602-610.
[14]	李然, 汤承, 罗雪, 岳华. 一株牦牛源G6P[11]型牛轮状病毒的分离鉴定及部分基因的序列分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 592-601.
[15]	杨振兴, 孟锦昕, 肖雷, 朱建波, 廖德芳, 高林, 李占鸿, 杨恒, 李华春. 流行性出血病病毒(EHDV)血清7型毒株在中国的首次分离与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 602-610.