鸭肠炎病毒gD基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位

畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (6): 922-927.

鸭肠炎病毒gD基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位

刘琰，徐凝，付培芬，母晓宇，董井泉，马波^*，王君伟^*

东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030

收稿日期:2011-10-28 修回日期:1900-01-01 出版日期:2012-06-25 发布日期:2012-06-25
通讯作者: 马波，王君伟
作者简介:刘琰（1986-），女，山东济宁人，硕士，主要从事病毒分子生物学与生物制品学研究，E-mail：liuyanhallo@163.com
基金资助:
高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20102325110004）；黑龙江省科技攻关项目（GB01B503-02；GB04B504）；东北农业大学博士启动基金

Prokaryotic Expression of DEV Extracellular gD Gene and Its Subcellular Localization in Virus-infected DEF

LIU Yan, XU Ning, FU Pei-fen, MU Xiao-yu, DONG Jing-quan, MA Bo^*, WANG Jun-wei^*

College of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China

Received:2011-10-28 Revised:1900-01-01 Online:2012-06-25 Published:2012-06-25
Contact: MA Bo1*, WANG Junwei1*

摘要/Abstract

摘要：

以本实验室获得的鸭肠炎病毒(DEV) C-KCE株US区基因序列(GenBank登录号EU714267)为基础PCR扩增出gD基因胞外区(gDw)，将其定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)并转化至大肠杆菌Rosetta^TM(DE3)pLys。经IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表明gD基因胞外区在大肠杆菌中获得与预期大小相符的表达蛋白。重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，血清琼扩效价达1∶16，噬斑减数中和试验测定血清中和抗体效价达1∶64。通过免疫荧光技术首次对gD进行亚细胞定位检测,结果表明DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后4 h近核区域细胞质内首先开始出现荧光,12 h以后显著增加，明显的点状绿色荧光广泛存在于胞质中。本研究为进一步开展DEV gD的功能研究提供了重要数据和材料。

关键词: 鸭肠炎病毒, gD, 原核表达, 噬斑减数中和试验, 亚细胞定位

Abstract:

The extracellular gD gene was amplified by PCR from DEV genomic DNA according to our laboratory discovered gene sequence (GenBank accession number EU714267). The recombinant expression plasmid pET-30a-gDw could effectively express gDw fusion protein that was used to immunize rabbits. The titer of antibody tested by agar diffusion reaction was 1:16. Plaque reduction neutralization test showed that its neutralization antibody titer was up to 1:64. By indirected immunofluorescence, the results showed that gD appeared in the cell cytoplasm near the nuclear as early as 4 hours post infection. After 12 hours post infection, the fluorescence in cytoplasm was increased. Above all, the results afforded significant data for the study on the function of DEV gD.

Key words: duck enteritis virus, gD, prokaryotic expression, plaque reduction neutralization test, subcellular localization

中图分类号:

S852.659.1

刘琰;徐凝;付培芬;母晓宇;董井泉;马波;王君伟. 鸭肠炎病毒gD基因胞外区的原核表达及在感染鸭胚成纤维细胞中的定位[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(6): 922-927.

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