猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用

畜牧兽医学报 ›› 2006, Vol. 37 ›› Issue (11): 1198-1201.

猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用

赵宇军;许冬梅;朱远茂;薛飞;相文华

1山西农业大学动物科技学院,太谷 030801;2 山西农业大学生命科学院，太谷 030801；3中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨 050001

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-11-25 发布日期:2006-11-25

Expression of Swine Hepatitis E Virus ORF2 and Development of ELISA Based on the Expressed Protein

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-11-25 Published:2006-11-25

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法，根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因（ORF2）的抗原性及水溶性分析，在其序列上设计一对引物，上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点，用PCR方法扩增，获得369 bp大小的相应片段，位于ORF2 128-497 bp处。将扩增片段克隆到pET-32a构建了原核表达载体pET32a-DQ01，经测序证明该片段正确插入。将pET32a-DQ01转化BL21并诱导表达，SDS-PAGE结果显示表达蛋白大小为33 ku，Western-blot 结果表明表达的蛋白质具有生物活性，将表达蛋白作为诊断抗原，对反应条件进行优化，初步建立了ELISA诊断方法。

关键词: 猪戊型肝炎, 结构蛋白基因, 原核表达, ELISA

Abstract: To develope a method to detect the antibody of swine hepatitis E virus in pigs, a pair of primers were designed according to the ORF2 of swine hepatitis E virus DQ1 strain, and the ORF2 about 369 bp was amplified by PCR. Then the fragment was inserted into pET-32a to establish a expression vector which was named pET32a-DQ1. The sequence analysis showed that the sequence was correct. Then the pET32a-DQ1 was transformed into E.coli BL21, the segment was expressed. The result of SDS-PAGE showed that the expressed protein was about 33ku. Western-blot results indicated that the protein could reacted with swine HEV antiserum. With the protein, a ELISA method for detection of HEV was developed and the primary test revealed the feasibility for clinical use.

Key words: swine HEV, ORF2, prokaryotic expression, ELISA

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