畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (8): 1193-1200.doi:

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鹅β-防御素基因克隆与生物学特性的初步分析

周财源1,2,蔺利娟1,2,韩宗玺2,邵昱昊2,刘胜旺2,马得莹1*
  

  1. (1.东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨 150030; 2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 禽传染病研究室, 哈尔滨 150001)
  • 收稿日期:2010-06-30 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-08-30 发布日期:2011-08-30
  • 通讯作者: 马得莹

  • Received:2010-06-30 Revised:1900-01-01 Online:2011-08-30 Published:2011-08-30

摘要: 本试验采用RT-PCR方法,从鹅的骨髓细胞中扩增到禽β防御素(AvBD)基因。测序结果表明,该基因的cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸。经遗传进化分析发现,该基因推导的氨基酸序列与鸡AvBD5的同源性最高,达84.8%。因此,将其命名为鹅AvBD5。进一步将该基因定向插入到pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建pGEX-AvBD 5重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL 21,于37 ℃不同时间进行诱导表达,SDSPAGE检测外源基因的表达情况。结果表明,重组鹅AvBD 5融合蛋白的分子量约为32 ku,重组蛋白以包涵体形式存在。采用菌落计数法进行抗菌活性测定,结果表明,重组鹅AvBD 5有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较强抗菌作用。此外,该蛋白对温度和pH有较高的稳定性。