含非洲马瘟病毒部分核酸序列的病毒样颗粒的研制

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.018

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (4): 637-643.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.018

含非洲马瘟病毒部分核酸序列的病毒样颗粒的研制

孙敏^1，2，梁成珠²，王群²，张晓文²，肖西志²，耿娟²，陈吉祥¹

（1.中国海洋大学海洋生命学院，青岛 266005； 2.山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，青岛 266002）

收稿日期:2014-08-15 出版日期:2015-04-23 发布日期:2015-04-23
作者简介:孙敏（1976-），女，山东青岛人，高级兽医师，硕士，主要从事动植物产品检测，E-mail：sunminxh@sina.com
基金资助:
国家质检总局科研基金资助项目（2011IK010；2011IK011）

Preparation of the Virus-like Particles Containing the Partial Gene Fragment of AHSV

SUN Min^1，2，LIANG Cheng-zhu²，WANG Qun²，ZHANG Xiao-wen²，XIAO Xi-zhi²，GENG Juan²，CHEN Ji-xiang¹

(1.College of Marine Life Sciences，Ocean University of China，Qingdao 266005，China；2.Inspection and Quarantine Technical Center of Shandong Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Qingdao 266002，China)

Received:2014-08-15 Online:2015-04-23 Published:2015-04-23

摘要/Abstract

摘要：

VP7蛋白是非洲马瘟病毒（AHSV）群特异性蛋白，其编码基因S7基因常被用作AHSV RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测的靶标基因。本研究旨在构建耐RNase的内含AHSV部分核酸序列的病毒样颗粒。首先合成S7基因保守序列，然后克隆到含有噬菌体包膜蛋白基因的带组氨酸纯化标签的假病毒表达载体pNH-MS2his上，成功构建原核表达载体pNH-MS2his-VP7。将重组质粒pNH-MS2his-VP7转化BL21(DE3)，并进行诱导表达及镍离子亲和层析纯化后，得到含AHSV 部分RNA片段的病毒样颗粒。试验证实该病毒样颗粒均匀性和稳定性良好，可作为AHSV PCR检测的质控品和标准品使用。

Abstract:

This experiment was conducted to prepare the virus-like particles containing the partial gene fragment of African horse sickness virus (AHSV).Genome segment 7 (S7) encoding protein VP7，the group-specific protein of AHSV，is a primary target for reverse transcription-PCR and real time reverse transcription-PCR detection of AHSV.The conservative sequence of S7 gene was synthesized and cloned into plasmid pNH-MS2his，which contained the coat protein gene of E.coli bacteriophage MS2 and His tag，to construct the prokaryotic express vector pNH-MS2his-VP7.The recombinant plasmid pNH-MS2his-VP7 was transformed into BL21 (DE3).Expression of the target protein was induced by IPTG for 5 h.The virus-like particles containing the S7 RNA sequence of AHSV were simply obtained by induction and sequent Ni+ chromatography purification.The virus-like particles were confirmed have good uniformity and stability.They have great prospect as the standard and quality control in the detection of AHSV.

中图分类号:

S852.659.4

孙敏，梁成珠，王群，张晓文，肖西志，耿娟，陈吉祥. 含非洲马瘟病毒部分核酸序列的病毒样颗粒的研制[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(4): 637-643.

SUN Min，LIANG Cheng-zhu，WANG Qun，ZHANG Xiao-wen，XIAO Xi-zhi，GENG Juan，CHEN Ji-xiang. Preparation of the Virus-like Particles Containing the Partial Gene Fragment of AHSV[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(4): 637-643.

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