本试验旨在通过克隆Visfatin基因,将其在原核表达系统中表达并纯化,通过3T3-L1细胞的分化验证其活性,成功获得鸡重组Visfatin蛋白。以AA肉仔鸡肝组织总RNA为模板,qRT-PCR扩增Visfatin基因,转化进入pGEM-T载体,再与原核表达载体pET-30a连接转化,获取含pET-30a-Visfatin重组质粒的E.coli BL21(DE3)表达菌株。以IPTG诱导重组菌株,优化表达条件,SDS-PAGE鉴定表达情况。采用镍离子亲和层析对Visfatin蛋白进行纯化,Western blot鉴定表达蛋白,并通过3T3-L1细胞的分化情况鉴定表达蛋白Visfatin的活性。结果,通过NcoⅠ、XhoⅠ酶切获得的结果与预期目的条带大小相符,成功构建pET-30a-Visfatin表达载体。SDS-PAGE检测结果表明,在培养基pH为8.0,IPTG终浓度为0.4 mmol•L-1,30 ℃条件下,诱导10~12 h时可溶性蛋白表达量最大。通过镍离子层析纯化Visfatin蛋白,在SDS-PAGE的60 ku处可见一条与预期一致的蛋白条带。Western blot证明纯化蛋白可与6*His标签特异性结合。油红O染色结果表明,与对照组相比Visfatin诱导的3T3-L1细胞有更多的脂滴形成。qRT-PCR结果显示,在3T3-L1细胞分化过程中,Visfatin作用下标志基因PPARγ、aP2、FAS 和C/EBPα的表达量显著增加(P<0.05)。本研究成功建立了一套标准化的鸡Visfatin重组蛋白表达程序,获得了具有生物活性的鸡Visfatin,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。