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当期目录

2013年 第44卷 第12期 刊出日期:2013-12-23
综述
高通量技术挖掘猪microRNA的研究进展
吴望军,陈杰,黄瑞华,刘红林
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1857-1866.  doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.001
摘要 ( 185 )   HTML( )    PDF (1201KB) ( 1028 )  
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microRNA(miRNA)是一类功能强大的小RNA分子,大量的研究表明miRNA在生物的各种生命活动中发挥着重要的作用。本文首先对miRNA的发现、生成与作用机制进行了简单的阐述,并对测序技术的发展历史与新一代测序技术的出现进行了回顾;之后重点对高通量miRNA芯片技术与深度测序技术在猪miRNA研究中的应用进行了综述,并对未来miRNA的研究重点进行了展望。

哺乳动物精子获能前后的理化变化及获能机制研究进展
贺亚南,朱化彬,陈晓丽,郝海生,秦彤,赵学明,路永强,王栋
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1867-1873.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.002
摘要 ( 314 )   HTML( )    PDF (422KB) ( 829 )  
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 综述了精子获能前后的运动轨迹和质膜微观结构的改变,及与之相伴的代谢类型、酶系活性和相关离子流动等一系列理化变化,并从胆固醇外流、活性氧产生、蛋白质磷酸化、膜电位极化等方面阐述了获能机理,同时指出,蛋白酪氨酸磷酸化是精子获能的关键。提出应用转录组学、蛋白组学结合生物信息学等技术,研究获能过程胆固醇转运体的作用方式、胞外Ca2+对获能的影响、与质膜胆固醇流失相伴的膜外Ca2+HCO3-内流顺序及其关系、与信号传导相关蛋白的酪氨酸磷酸化等重要获能事件,将为深入研究精子获能机制提供一定的理论参考。

遗传繁育
高、低脂鸡脂肪组织ATGL基因的表达及其激素调控的差异分析
史铭欣,荣恩光,周纬男,史洪岩,李辉,王宁
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1874-1881.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.003
摘要 ( 206 )   HTML( )    PDF (2955KB) ( 909 )  
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为研究脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)在鸡脂肪沉积中的作用,并分析肾上腺素和胰高血糖素对高、低脂鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因表达的影响,本研究利用半定量RT-PCR分析鸡ATGL基因的组织表达谱;利用Real-time RT-PCR分析ATGL基因及其活化因子Comparative gene identification-58CGI-58)基因在17周龄东北农业大学肉鸡高、低腹脂双向选择品系(NEAUHLF)第16世代鸡群脂肪组织中的表达差异,以及肾上腺素和胰高血糖素对高、低脂系肉鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因表达的影响。结果显示,ATGL基因在鸡腹部脂肪、皮下脂肪、嗉囊周围脂肪、肌胃周围脂肪、肾脏及肝脏中表达量较高;低脂系肉鸡腹部脂肪组织ATGLCGI-58基因的表达总体均高于高脂系鸡,且均在第2周龄达到显著性差异(P0.05);肾上腺素和胰高血糖素都能够上调高脂系鸡脂肪组织和脂肪细胞ATGL基因的表达,并促进机体的脂肪分解,暗示高脂系鸡对2种激素的刺激相对敏感。本研究结果为揭示高、低脂肉鸡脂肪性状差异的原因以及ATGL在鸡脂肪沉积中的作用奠定了基础。

基于时序表达谱芯片挖掘鸡脂肪酸代谢关键调控基因
王洪志,常国斌,马腾,翟飞,夏明秀,刘璐,陈静,徐璐,陈国宏
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1882-1890.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.004
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (3690KB) ( 1214 )  
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不同脂肪酸的代谢产物决定了鸡肉风味的差异,找出影响鸡肌肉组织中脂肪酸代谢的关键调控基因对提高肉品质以及对优质肉鸡新品系选育具有重要意义。本研究对KEGGWikipathway数据库中脂肪酸代谢网络进行整合分析,挖掘鸡脂肪酸代谢的关键基因,通过Gene Spring筛选出不同周龄的肌肉组织中表达谱芯片与关键基因共表达的差异基因(Pearson相关系数≥0.9),然后导入Cytoscape进行共表达网络分析,最后进行跨物种检索关键调控基因功能,得到鸡肌肉组织中脂肪酸代谢的节点基因和相关通路。结果表明,Ep300Traf2Pak1等基因是影响鸡肌肉中脂肪酸代谢的节点基因,MAPK通路、ErbB通路和Herpes simplex infection通路可能是肌肉中脂肪酸代谢调控的关键通路,该结果为研究家禽肌肉中脂肪酸代谢的分子机制和进一步筛选优质肉质基因提供了基础资料。

基于群体分化指数FST的绵羊全基因组选择信号检测
曾滔,赵福平,王光凯,吴明明,魏彩虹,张莉,李利,张红平,杜立新
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1891-1899.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.005
摘要 ( 305 )   HTML( )    PDF (1266KB) ( 1301 )  
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本研究基于苏尼特羊(n=66)、德国肉用美利奴羊(n=159)和杜泊羊(n=93)3个群体的Illumina Ovine SNP50 芯片分型数据,借助群体分化指数FST法进行群体间选择信号的检测分析,应用生物信息学方法分析寻找选择信号区域内的重要基因。结果,共找到343个“离群”位点,通过基因注释找到这些位点对应的365个候选基因。其中部分基因与绵羊生长、繁殖及肉质性状相关,如IGF2PB3IGF1RBMP2BMPR1BCAPN3等,本研究结果也进一步验证了前期利用CNVGWAS研究检测到的基因结果。通过GO分析发现,这些基因主要富集在新陈代谢和去甲基化等条目。通过群体分化指数FST能有效地检测到具有选择信号的基因,其中包括绵羊部分重要经济性状的候选基因,研究结果能为绵羊的育种提供参考。

遗传繁育
蒙古马运动相关基因的表达量差异研究
杨丽华,白东义,高雅罕,乌日古木拉,苏日古嘎,芒来
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1900-1906.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.006
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (1659KB) ( 1173 )  
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通过对蒙古马运动前后与运动相关基因表达量差异的研究,了解与蒙古马耐力相关的基因。采用荧光定量 PCR方法检测蒙古马臀中肌中与能量代谢和肌肉生长相关的7个基因的mRNA表达量在静止期(T0)10 000 m耐力运动刚刚结束(T1)及运动后恢复期(4 h后,T2)的变化;并对mRNA表达量差异显著的基因采用Western blotting 方法对其蛋白的表达进行研究。结果表明,与蒙古马静止期基因的mRNA表达量相比,10 000米的耐力运动4 h后有2个基因(PPARGC1APDK4)的mRNA表达显著上调(P0.05),Western blotting 结果也显示这2个基因的蛋白表达量在运动后发生了增加。以上结果初步揭示了,PPARGC1APDK42个与能量代谢相关的基因和蒙古马的运动关系密切,为深入研究蒙古马的运动提供了基础数据。

中国荷斯坦牛乳房炎易感性及抗性的全基因组关联分析
王晓,解小莉,王胜,钱梦樱,马裴裴,张沅,孙东晓,刘剑锋,丁向东,姜力,王雅春,张毅,张胜利,张勤,俞英
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1907-1912.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.007
摘要 ( 300 )   HTML( )    PDF (996KB) ( 1333 )  
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本研究首先通过SAS 9.1分析2 093头北京地区中国荷斯坦牛体细胞数(SCC)的变化规律,依据SCC将牛只划分为乳房炎易感牛(Case)及抗性牛(Control);再基于Case-control设计进行全基因组关联分析。通过染色体水平的Bonferroni校正,共检测到6 SNPs与乳房炎易感性及抗性显著相关。其中19号染色体检测出的显著SNPARS-BFGL-NGS-78516P=5.200 65e-05)在其200 kb范围内共有3个基因(PRKRIP1ARHGAP23TBX21)与炎症反应密切相关。研究结果为奶牛乳房炎易感性及抗性的分子遗传基础研究提供了数据。

日粮低营养对母羊下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达及相关激素分泌的影响
王军,孙蕾,周海柱,张涛,徐晶,娄玉杰
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1913-1918.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.008
摘要 ( 226 )   HTML( )    PDF (1225KB) ( 589 )  
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 本研究通过分析日粮低营养对母羊下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达及相关激素分泌的影响,明确KiSS-1/GPR54系统在日粮营养调控母羊初情期启动中的作用。选择12只体重为16 kg左右的3月龄雌性小尾寒羊,随机分为2组(n=6),分别给予标准营养和低营养(对照组采食量的60%),饲喂30 d后,采集下丘脑和血液,利用实时荧光定量PCR、免疫组化、ELISA和放免技术测定下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达量及LH、胰岛素和Leptin浓度。结果表明,日粮低营养可显著降低母羊下丘脑弓状核KiSS-1基因和蛋白的表达量(P0.01),但对GPR54基因表达量并无影响(P0.05);日粮低营养可显著降低母羊血清中LH和胰岛素(P0.05)浓度,极显著降低Leptin浓度(P0.01)。结果提示,下丘脑KiSS-1/GPR54系统可通过降低KiSS-1表达来参与日粮低营养对初情期启动的调控。

维生素E对无血清培养种母鸡颗粒细胞凋亡的影响
张宏馨,邸科前,陈辉,黄仁录
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1919-1925.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.009
摘要 ( 212 )   HTML( )    PDF (2862KB) ( 879 )  
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本试验旨在研究维生素E对无血清培养诱导的种母鸡卵泡颗粒细胞凋亡的影响。试验选用健康、有规则产蛋周期的高峰期种母鸡,收集小黄卵泡,分离颗粒细胞。将颗粒细胞经含0.5%FBS预培养后,用维生素E浓度为10 mg·L-1的无血清培养液继续培养。用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡和细胞周期分布情况。结果表明,与对照组相比,10 mg·L-1维生素E可以降低颗粒细胞的凋亡率(P0.01),使处于S期的细胞比例增加(P0.05)。结果提示,维生素E可以促进种母鸡颗粒细胞由G0/G1期进入S期,使更多颗粒细胞通过G1/S期限制点,从而抑制无血清培养所诱导的种母鸡颗粒细胞凋亡。

PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备
何晓琳,袁超,屈雷,陈玉林
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1926-1931.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.010
摘要 ( 272 )   HTML( )    PDF (2957KB) ( 700 )  
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本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法, 从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用PCRRT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT-PCR结果表明,该基因在转录水平上表达。另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。

沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞IFN-γSTAT1 mRNA表达的影响
赵飞艳,敖长金,包美艳,萨茹丽
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1932-1938.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.011
摘要 ( 164 )   HTML( )    PDF (2405KB) ( 680 )  
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本研究在体外条件下研究了沙葱多糖对绵羊外周血淋巴细胞IFN-γ与STAT1 mRNA表达的影响,旨在从分子水平上探讨沙葱多糖的抗肿瘤作用机制。试验用不同浓度的沙葱多糖(050100150200250 μg·mL-1)体外作用于绵羊外周血淋巴细胞,作用持续12244872 h后分别提取细胞的总RNA,以β-actin作为内参基因,用实时荧光定量RT-PCR方法测定IFN-γ与STAT1 mRNA相对表达量的变化,并对IFN-γ与STAT1PCR产物进行测序分析。结果显示,沙葱多糖能够显著提高IFN-γ与STAT1 mRNA相对表达量(P<0.05);随着沙葱多糖浓度的升高,IFN-γSTAT1  mRNA相对表达量基本呈升高的趋势,且测序分析结果证明扩增产物为羊的IFN-γ与STAT1基因序列。结果表明,沙葱多糖可显著促进绵羊外周血淋巴细胞IFN-γ与STAT1 mRNA的表达,进而发挥其抗肿瘤作用。

动物营养
小刺猴头发酵多糖对肉鸡胆固醇沉积的影响
尚红梅,宋慧,姚旭,沈思捷,王丽娜,吴波,姜云瑶,丁国栋
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1939-1945.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.012
摘要 ( 203 )   HTML( )    PDF (420KB) ( 610 )  
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本试验旨在研究小刺猴头发酵多糖(HFP)对肉鸡血清、肌肉、肝脏、心脏、肌胃、粪便中胆固醇含量的影响。试验选用1日龄AA肉鸡240只,随机分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复20只,分别饲喂含HFP00.1%0.3%0.5%的饲粮,试验时间为42 d。结果表明,在不同日龄阶段(142842日龄),与对照组相比,饲粮中添加0.3%0.5%水平的HFP可显著降低肉鸡血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量(P0.05),显著增加血液中高密度脂蛋白胆固醇含量(P0.05);0.3%0.5%水平HFP 添加组肉鸡的胸肌、腿肌和肝脏中胆固醇含量均显著低于对照组(P0.05),0.5%水平HFP 添加组肉鸡肌胃中胆固醇含量显著低于对照组(P0.05),饲粮中添加HFP对肉鸡心脏胆固醇水平没有显著影响(P0.05);与对照组相比,饲粮中添加不同水平的HFP能够显著增加肉鸡粪便中胆汁酸的排泄(P0.05),0.3%0.5%水平的HFP添加组肉鸡粪便中胆固醇含量也显著高于对照组(P0.05)。结果提示,肉鸡饲粮中添加HFP可能通过增加肉鸡粪便中胆固醇和胆汁酸的排泄,从而降低肉鸡肌肉、肝脏、肌胃中胆固醇的含量。

20~35 kg体重阶段杜泊×小尾寒羊F1代公羔体内钙、磷、钠、钾、镁含量及分布特点
纪守坤,许贵善,姜成钢,邓凯东,楼灿,屠焰,张乃锋,聂明非,刁其玉
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1946-1953.  doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.013
摘要 ( 160 )   HTML( )    PDF (1419KB) ( 632 )  
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本试验旨在研究20~35 kg杜泊×小尾寒羊F1代公羔羊在自由采食条件下不同体重阶段体组织中钙(Ca)、磷(P)、钠(Na)、钾(K)、镁(Mg)的含量变化及分布规律。选取杜泊×小尾寒羊(杜寒)F1代公羔羊21只,随机分为3组,各组自由采食同种颗粒饲料,分别于体重202835 kg时屠宰并分离骨骼、肌肉、羊皮、内脏(含血)、脂肪和羊毛组织,分析各部分矿物质含量。结果表明,随屠宰活重(SBW)的增加羔羊胴体重、肌肉重、羊皮重、内脏重和羊毛重均显著增加(P0.05),生长速度较稳定;20 kg组骨骼重量显著低于2835 kg组(P0.05),生长前期快后期慢;35 kg组脂肪重显著高于2820 kg组(P0.05),生长模式为前期慢后期快。在各屠宰组中,35 kg组骨骼中钙、磷、镁含量均显著高于2028 kg组(P0.05);在肌肉中,20 kg组磷、钠、钾、镁含量均显著高于35 kg组(P0.05);在羊皮与内脏中,随屠宰体重增加,矿物质含量不同程度增加。另外,骨骼中含有体内总含量约98.5%的钙,82.3%的磷,41.5%的钠和69.8%的镁,而肌肉中含有体内总量50.1%的钾。结果显示,钙、磷、钠、钾和镁元素在羔羊体内的含量随体重的变化差异显著,不同元素在不同组织器官中的含量差异显著。随羔羊体重增加肌肉中各矿物质含量降低,而骨骼、羊皮、内脏中矿物质含量存在不同程度增加。骨骼是钙、磷、钠和镁的主要分布器官,钾主要分布在肌肉中。

泌乳奶牛尾动脉和阴外动脉血浆中氨基酸含量的比较
刘娜,哈斯额尔敦,张兴夫,宋利文,敖长金,高民
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1954-1960.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.014
摘要 ( 209 )   HTML( )    PDF (376KB) ( 640 )  
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 本试验旨在通过对3种日粮模式下泌乳奶牛尾动脉和阴外动脉血浆中氨基酸含量的比较,探讨在乳腺对氨基酸摄取效率等研究中是否可以用尾动脉血代替阴外动脉血。选用体况良好,体重相近(554±21kg),泌乳中期((120±24)d),产奶量相近((24.30±1.47)kg·d-1)的荷斯坦奶牛30头,分为3组,每组10头。试验设计为完全随机试验设计,饲喂日粮分别为日粮1(苜蓿+全株玉米青贮+羊草的混合粗饲料日粮组)、日粮2(概略养分水平约同日粮1秸秆日粮组)和日粮3(秸秆全部替代日粮1粗饲料日粮组)。试验持续28 d,试验期最后2 d分别采集阴外动脉和尾动脉血样,并测定尾动脉及阴外动脉血浆中游离氨基酸的含量。结果表明:3种不同日粮模式下尾动脉与阴外动脉血浆中大多数单一氨基酸含量差异均不显著(P>0.05),只有Thr含量差异显著(P=0.023 4)。综上所述,在一定情况下可以用尾动脉血代替阴外动脉血研究乳腺对氨基酸的摄取效率。

预防兽医
嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)灭活苗对商品猪免疫保护效力的研究
汪正亮,周金柱,王小波,李基棕,高杏,俞天奇,高崧
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1961-1969.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.015
摘要 ( 272 )   HTML( )    PDF (2566KB) ( 852 )  
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运用多功能细胞电穿孔仪将本实验室构建的重组pSK-dPCV1-2质粒转染Dulac细胞,传代培养后获得具有稳定感染细胞的重组嵌合型猪圆环病毒PCV1-2。将该重组病毒灭活后与ISA 206 VG佐剂乳化制成灭活苗,通过免疫效力试验来评价该疫苗的免疫保护效力。将42日龄PCV2母源抗体水平较低的20头商品猪随机分成4组,另外2头作为健康对照组。分2次免疫,通过检测不同时间的间接免疫荧光抗体滴度、中和抗体滴度、平均日增重、攻毒后病毒血症以及解剖后病理变化和组织中的病毒载量等各项指标评价疫苗的免疫保护效果。结果显示:二免后14 d,所有免疫组试验猪都表现为PCV2血清学阳性,且中和抗体水平在1/151/20。在猪的增重方面,免疫组猪和健康对照组猪的体重都有增加,而攻毒对照组猪的体重没有增加,且3个免疫组和攻毒对照组之间平均日增重差异显著(P0.05)。攻毒后21 d扑杀试验猪,免疫组猪的淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比攻毒对照组轻微。攻毒对照组的淋巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞,且有多量的淋巴细胞缺失,免疫组未见多核巨细胞,淋巴细胞缺失也较少。淋巴结中PCV2病毒载量的log10在攻毒对照组为5.566±0.432,在104.0105.0 106.0 TCID50·mL-1免疫组分别为4.469±1.0234.434±0.7163.521±0.958,其中105.0 106.0 TCID50·mL-1免疫组与攻毒对照组差异显著(P0.05),但是,试验期间各试验组和健康对照组均未观察到明显的类似PMWS的临床症状。断奶仔猪免疫105.0 TCID50·mL-1以上嵌合型猪圆环病毒PCV1-2灭活苗可以有效地抵抗PCV2b/1B/Jiangsu/Jingjiang/2012/11/08病毒感染。

携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答研究
熊朝丽,张华,程振涛,周碧君,王开功,文明
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1970-1975.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.016
摘要 ( 178 )   HTML( )    PDF (856KB) ( 562 )  
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为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后 7153045 d的山羊消化道特异性 SIgA 含量中,重组细菌组明显高于弱毒疫苗组(P<0.05)45 d时到达最高值(18.172±0.122) μg·L-1(2)在诱导产生特异性 P32 抗体上,重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但差异不明显(P>0.05)(3)在特异性淋巴细胞转化效率上,免疫15 d前重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但免疫 30 d 后重组细菌组高于弱毒疫苗组,但差异均不显著(P>0.05)(4)在诱导产生特异性细胞因子方面,重组细菌组山羊血清 IL-2 含量低于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清 IL-5 含量高于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清 TNF-β高于弱毒疫苗组,差异显著(P<0.05),而血清 IFN-γ TNF-α 含量与弱毒疫苗组差异不显著(P>0.05)。上述结果表明,构建的携带 pVAX1- GPV-P32 重组减毒沙门菌能诱导山羊产生较好的免疫应答反应。

鸡J亚群禽白血病病毒AH-J11株的全基因组感染性克隆构建
王蓓,刘芳,王汉清,李宁,魏建忠,刘光清,王桂军
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1976-1981.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.017
摘要 ( 198 )   HTML( )    PDF (814KB) ( 617 )  
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为探究鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,采用PCR方法分4段分别扩增出J亚群禽白血病病毒安徽分离株AH-J11的前病毒cDNAPCR产物经克隆鉴定,酶切后顺次连接,获得含有完整ALV-J AH-J11株前病毒cDNA的重组质粒,命名为pSK-AH-J11。将AH-J11株全基因序列克隆至pBluescript SK(+)载体中,得到重组质粒pBl-AH-J11,并将其转染鸡胚成纤维细胞(CEF)。通过间接免疫荧光试验,RT-PCRWestern blot检测,并经测序验证比对拯救前后病毒的gp85基因序列,结果均表明拯救出了1株重组J亚群禽白血病病毒(rALV-J)。本研究成功构建了鸡ALV-J的感染性克隆并救获了其重组病毒,为研究禽白血病的致病机理提供了良好的反向遗传操作技术平台。

基因Ⅶ型新城疫病毒对鸭和SPF鸡致病性比较研究
伊惠,胡北侠,杨少华,许传田,黄庆华,张琳,张秀美,王莉莉,张伟,袁朋,李建亮,崔言顺
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1982-1988.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.018
摘要 ( 207 )   HTML( )    PDF (4050KB) ( 812 )  
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旨在研究基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)对鸭的致病性,以明确鸭在NDV流行病学中的作用。选取2株鸭源基因Ⅶ型NDV流行株,以0.2和0.5 mL剂量分别通过滴鼻或肌肉注射对商品鸭进行人工感染试验,同时用0.1 mL剂量通过滴鼻感染SPF鸡。SPF鸡用2株NDV攻毒后表现气喘、流涎和排绿色稀粪等症状,并于3~6 d 100%发病死亡,而鸭用2株NDV攻毒后未见明显发病死亡。SPF鸡攻毒后喉头、泄殖腔棉拭和内脏组织病毒分离率明显高于试验鸭。病理组织学检查发现SPF鸡感染NDV后可见非化脓性脑炎、间质性肾炎和肺炎、明显的消化道和呼吸道炎症,而试验鸭仅呼吸道和消化道组织表现轻度炎症。本研究结果表明2株基因Ⅶ型NDV强毒对鸭无明显致病性,但鸭感染后NDV强毒后可以通过喉头或泄殖腔排毒,因此必须采取有效措施以防止NDV在鸡群和鸭群之间相互传播。

不同品种禽类ALV和REV感染情况调查
彭昊,吴元俊,秦丽莉,石梦霞,毕玉彧,言天久,宋丽丽,韦平
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1989-1993.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.019
摘要 ( 240 )   HTML( )    PDF (352KB) ( 576 )  
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为了解中国地方特有鸡种及其他禽类中ALV、REV 的自然感染状态,通过采集6种特有的家养禽类(包括六画山鸡、大麻鸭、小麻鸭、右江鹅、凌云乌鸡、隆林雪花鸡)的血清及肛拭子各593份,利用禽白血病病毒P27抗原检测试剂盒、禽白血病病毒A/B亚群和J亚群抗体检测试剂盒、禽网状内皮组织增生症病毒抗体检测试剂盒分别进行检测。结果发现,不同品种禽类的P27抗原的检出率差异较大,属于水禽的鸭、鹅均未检出,而六画山鸡和两个地方品种鸡呈现15.4%~43.2%的阳性率;与P27抗原检出情况类似,鸭、鹅禽白血病A/B亚型、J亚型的抗体水平均相对较低,而各个地方品种的鸡群则阳性率相对较高(7.7%~71.6%)。调查还显示,一些种群同时存在着ALV的P27抗原和抗体以及J亚型与A/B的多重感染,一些种群同时存在着ALV与REV共感染的情况,特别是雪花鸡群里甚至存在P27抗原、ALV-A/B抗体和REV抗体同时呈阳性的情况(9.47%)。通过此次流行病学调查,首次较为详尽地报道了中国地方特有品种鸡及家养非鸡禽类的ALV几种亚型、REV自然感染状态特别是混合感染情况,证实中国即使是一些纯地方品系的家禽也存在不同程度的ALV、REV感染。结果将有助于进一步明确禽白血病防控工作的重要性及紧迫性,为下一步的净化工作提供参考。

新型凝集技术快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌
杨磊,赵广英,窦文超
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  1994-1999.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.020
摘要 ( 237 )   HTML( )    PDF (1566KB) ( 774 )  
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为探求鸡白痢、鸡伤寒沙门菌快速检测的新型凝集技术,尝试用3种有机活性染料与抗体分别修饰二氧化硅活性微球制成免疫彩色二氧化硅微球(ICSN),构建快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌新型凝集技术。利用反相微乳法制备彩色二氧化硅纳米微球(CSN),用扫描电镜表征形貌特征和分散程度,通过凝集现象表征对鸡白痢、鸡伤寒沙门菌的检测效果。结果表明该新型凝集技术灵敏度好,其凝集结果醒目、直观、易于肉眼判别,且耗用抗体不到常规凝集试验的1/500,对目标菌的检测范围为102~109 cfu·mL-1;重复性和稳定性好,4 ℃放置28 d后,凝集效果与放置前无显著差异;具有较好的特异性和准确性。用ICSN构建的新型凝集技术具有灵敏、经济、稳定、简便、快速、准确等优点,不仅适用于快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门菌,还可为其它致病微生物快速检测提供基础模型。

基础兽医
黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抑菌机制的研究
陈禹先,周彤,谢鲲鹏,云宝仪,谢明杰
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  2000-2006.  doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.021
摘要 ( 181 )   HTML( )    PDF (2004KB) ( 855 )  
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研究黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑菌活性以及抑菌机制。以MRSA为供试菌,通过研究黄芩素对MRSA的抑制作用及其对细胞膜、蛋白质、拓扑异构酶活性的影响,并观察黄芩素与DNA结合后酶切图谱的变化等方面,较系统地阐述黄芩素对MRSA的抑菌作用机制。结果显示:黄芩素对MRSA有较强的抑制作用,其最小抑菌浓度为0.04 mg·mL-1;黄芩素能抑制MRSA菌体蛋白质的合成,当黄芩素作用MRSA 16 h后,其菌体蛋白质的含量比对照组降低44.62%;黄芩素能抑制拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ的活性,当黄芩素的浓度为0.025 mg·mL-1时即可抑制MRSA拓扑异构酶的活性;当黄芩素与DNA作用一定时间后,TaqⅠ的酶切电泳图谱发生了明显的变化,初步推测黄芩素与DNA的结合位点可能是在T与CGA碱基之间或结合在与T/CGA相类似的碱基位置。上述结果表明,黄芩素对MRSA有显著的抑菌活性,其作用机制可能是通过与DNA发生嵌入作用,抑制DNA拓扑异构酶的活性,使其不能进行正常的复制与转录,进而抑制了下游蛋白质的翻译过程,引起菌体内生物学功能的丧失,从而抑制菌体的生长和繁殖。

临床兽医
60例临床手术犬舒眠宁静脉麻醉效果的评价及其对肝、肾功能的影响
刘澜,李培德,侯加法
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  2007-2015.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.022
摘要 ( 253 )   HTML( )    PDF (459KB) ( 875 )  
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拟在临床手术病犬静脉舒眠宁麻醉后评价其麻醉效果及其对犬肝、肾功能的影响。以舒眠宁注射液用于门诊手术病犬60例,记录麻醉起效时间(T1)、单次注射麻醉维持时间(T2)、手术时间(T3)、苏醒时间(T4)、追加麻醉次数(N)及总用药量(SUM)。手术过程中评估犬各项生理参数,手术麻醉效果及苏醒质量,分别于麻醉前和苏醒时测定其血液生化和血常规参数。结果表明,犬舒眠宁麻醉后,其手术时间、苏醒时间、追加麻醉次数及总用药量依手术类型及动物体型而定。麻醉起效时间为(32.2±1.4s;单次注射舒眠宁麻醉维持时间为(25.7±1.6min,苏醒时间为(32.6±2.6min。手术麻醉效果为优级85.0% (51/60),良级11.7% (7/60),可级3.3% (2/60)。苏醒质量评分为3.8±0.1,苏醒期平稳,术后恢复良好。麻醉后血常规、总蛋白、白蛋白和球蛋白水平有所下降,但均在正常生理范围内;肝、肾功能正常。手术麻醉效果显示,舒眠宁注射液适用于犬的临床麻醉,麻醉效果确实,苏醒过程平稳,对肝、肾功能无明显影响。

金黄色葡萄球菌外毒素及荚膜特异性卵黄抗体联合治疗奶牛乳房炎效果研究
王林会,李晓宇,金礼吉,李淑英,徐永平
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  2016-2021.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.023
摘要 ( 253 )   HTML( )    PDF (1436KB) ( 748 )  
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本研究目的是评价金黄色葡萄球菌外毒素特异性卵黄抗体(IgY-toxins)及58336型金黄色葡萄球菌荚膜特异性卵黄抗体(IgY-T5IgY-T8IgY-T336)联合使用对奶牛乳房炎的治疗效果。乳酸脱氢酶试验表明,IgY-toxins能够有效中和外毒素对乳腺上皮细胞MAC-T的破坏作用。荧光显微镜观察发现,5 mg·mL-1IgY-T336可有效阻断金黄色葡萄球菌RN6390MAC-T的侵袭。与单独使用IgY-T336相比,5 mg·mL-1IgY-T3360.5 mg·mL-1IgY-toxins联合使用能够更加有效地保护MAC-T细胞,同时显著改善细胞的生长形态。临床型乳房炎试验表明,与PBS对照相比,对金黄色葡萄球菌感染乳池每天注射各20 mgIgY-T5IgY-T8IgY-T336IgY-toxins可显著降低(P<0.001)病牛乳汁的体细胞数(SCC),20 mgIgY-T5IgY-T8IgY-T336或者20 mgIgY-toxins虽然也可降低体细胞数,但是降低幅度显著低于联合治疗组(P<0.01)。所有治疗组奶牛乳汁的凝块水平都显著低于对照组(P<0.05)。本研究表明,荚膜及外毒素特异性卵黄抗体联合使用比其单独使用对乳房炎的治疗效果更好,在应用卵黄抗体治疗乳房炎时应该将荚膜和外毒素都列为抗体的靶点。

磺胺氯吡嗪钠中药复方对小鼠体内抗弓形虫疗效的观察
蒋蔚,陈永军,张花景,刘迎春,荆振宇,薛俊欣,王权
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  2022-2028.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.024
摘要 ( 232 )   HTML( )    PDF (1459KB) ( 621 )  
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为探索治疗动物弓形虫病的有效药物组方,本研究以磺胺嘧啶钠作为对照首先通过药物体外试验观察磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩抑制弓形虫增殖的效果,然后分别用磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩以及3种药物的复方制剂,对人工感染弓形虫RH株的KM小鼠进行体内治疗试验。体外试验表明磺胺氯吡嗪钠、磺胺嘧啶钠、黄芩和甘草对弓形虫速殖子均有一定的抑制效果, 磺胺氯吡嗪钠抑制效果最好。小鼠体内试验表明单独使用磺胺嘧啶钠、甘草和黄芩均可不同程度地延长小鼠存活时间,但均不能避免小鼠死亡,而单独使用磺胺氯吡嗪钠可使小鼠的存活率达到40%,在同等剂量下,磺胺氯吡嗪钠与黄芩和甘草配伍后,疗效得到明显提高,可显著延长小鼠存活时间,并使小鼠存活率高达50%。本研究的结果提示磺胺氯吡嗪钠具有显著体内抗弓形虫的作用,与甘草和黄芩配伍后的中西药复方制剂,能在保持疗效的基础上显著减少磺胺氯吡嗪钠的用量,因此磺胺氯吡嗪钠、甘草和黄芩复方制剂是未来治疗动物弓形虫病的优良方案之一。

四君子汤对脾虚大鼠肠道菌群多样性的影响
孟良艳,陈秀琴,石达友,黄海定,郭世宁
畜牧兽医学报, 2013, 44(12):  2029-2035.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.12.025
摘要 ( 378 )   HTML( )    PDF (2894KB) ( 1658 )  
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探讨四君子汤对脾虚大鼠肠道菌群多样性的影响。将48只大鼠随机分为空白组、模型组、中药四君子汤组、柳氮磺吡啶肠溶片(SASP)组,每组12只。将除空白组外的其余各组大鼠用利血平法造脾虚模型。然后给四君子汤、SASP分别灌胃治疗后,通过16S rDNA测序法分析肠道菌群多样性变化。结果表明:与模型组比较,四君子汤组中的肠道菌群多样性明显升高,但与西药组中的肠道菌群多样性有差异。四君子汤能通过改善肠道菌群的多样性调理脾虚证。