利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.01.028

畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (1): 207-212.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.01.028

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利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究

张冬杰，刘娣^*，张旭，汪亮，杨国伟

（黑龙江省农业科学院畜牧研究所，哈尔滨 150086）

收稿日期:2015-01-07 出版日期:2016-01-23 发布日期:2016-01-23
通讯作者: 刘娣，教授，E-mail：liudi1963@163.com
作者简介:张冬杰(1980-)，女，黑龙江桦南人，副研究员，博士，主要从事猪分子遗传学研究，Tel：0451-87502330，E-mail：djzhang8109@163.com
基金资助:
哈尔滨市科技局项目（2013RFQYJ037）

Study of Pig MSTN Gene Point Mutation Based on the CRISPR-Cas9 System

ZHANG Dong-jie，LIU Di^*，ZHANG Xu，WANG Liang，YANG Guo-wei

(Institute of Animal Husbandry，Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences，Harbin 150086，China)

Received:2015-01-07 Online:2016-01-23 Published:2016-01-23

摘要/Abstract

摘要：

为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育，本研究将带有绿色荧光蛋白（GFP）和肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN）靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系，利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞，使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况，以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果。结果发现，随机挑选的100个阳性克隆中，38个发生了变异，突变效率为38%，其中32个为插入突变，6个为缺失突变。插入突变中突变1（Mutation1）所占比例最高，为47.4%。本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38%，是目前进行基因组编辑的一个有效工具，推测其突变类型具有一定的偏好性。

Abstract:

In order to more effectively apply CRISPR-Cas9 in researches on gene functions and transgenetic animals，we transfected the PK15 cell line with the CRISPR-Cas9 system containing GFP and Myostatin.Positive cells were separated and collected by flow cytometry.Point mutations were detected and analyzed by PCR and DNA sequencing.The results showed that，among 100 randomly-selected positive clones，the mutation rate was 38%，including 32 insertions and 6 deletions.Mutant 1(one of the insertions) had the highest frequency(47.4%).In this experiment，the mutation rate of CRISPR-Cas9 system is 38% and certain mutation type bias is observed.

中图分类号:

S828
S813.3

张冬杰，刘娣，张旭，汪亮，杨国伟. 利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(1): 207-212.

ZHANG Dong-jie，LIU Di，ZHANG Xu，WANG Liang，YANG Guo-wei. Study of Pig MSTN Gene Point Mutation Based on the CRISPR-Cas9 System[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(1): 207-212.

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