猪miR-135a-5p预测靶基因APC的鉴定

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.004

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (4): 534-541.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.004

猪miR-135a-5p预测靶基因APC的鉴定

陈晨^1，2，邓缘¹，任慧波¹，朱吉¹，胡雄贵¹，蒋思文^2*，彭英林^1*

（1.湖南省畜牧兽医研究所，长沙 410131； 2.华中农业大学动物科技学院，武汉 430070）

收稿日期:2014-07-08 出版日期:2015-04-23 发布日期:2015-04-23
通讯作者: 蒋思文，教授，E-mail：jswhzau@163.com；彭英林，研究员，E-mail：ylpeng_1965@163.com
作者简介:陈晨(1986-)，男，河南开封人，助理研究员，博士，主要从事猪分子遗传育种的研究，Tel：0731-84611058，E-mail：2004chch@163.com
基金资助:
湖南省科技计划项目（2014NK3036）；国家自然科学基金（31401097）

Identification of APC as the Potential Target of miR-135a-5p in Pigs

CHEN Chen^1，2，DENG Yuan¹，REN Hui-bo¹，ZHU Ji¹，HU Xiong-gui¹，JIANG Si-wen^2*，PENG Ying-lin^1*

(1.Hunan Institute of Animal and Veterinary Science，Changsha 410131，China；2.College of Animal Science and Technology，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China)

Received:2014-07-08 Online:2015-04-23 Published:2015-04-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在鉴定猪miR-135a-5p靶向脂肪发育的相关基因。首先，利用生物信息学软件分析发现，结肠腺瘤性息肉病（APC）基因的3′ 非翻译区（3′ UTR）具有两个与猪miR-135a-5p结合的潜在位点。其次，构建APC基因野生型（APC 3′ UTR）和突变型（APC 3′ UTR m1、APC 3′ UTR m2、APC 3′ UTR m3）3′ UTR双荧光素酶载体，并分别将其与miR-135a-5p mimics、阴性对照（NC）共转染PK-15细胞后检测荧光活性。结果显示：miR-135a-5p mimics显著降低APC 3′ UTR和APC 3′ UTR m2载体的荧光活性（P<0.05），而APC 3′ UTR m1和APC 3′ UTR m3载体的荧光活性得到完全恢复，表明miR-135a-5p主要结合在预测的第一个位点。进一步的分析表明，miR-135a-5p抑制猪前体脂肪细胞内源APC基因的mRNA和蛋白质表达水平。研究结果证实，猪miR-135a-5p靶向APC基因，且调控其表达。本试验为深入研究猪miR-135a-5p的生物学功能及其调控脂肪形成的作用机制提供了基础。

Abstract:

This research aimed to investigate the potential target genes related to adipose tissue development.The bioinformatics softwares were used to predict the target gene of ssc-miR-135a-5p，and it was found that the 3′ UTR of adenomatous polyposis coli (APC) gene had 2 putative binding sites with miR-135a-5p.The wild-type (APC 3′ UTR) and 3 mutated (APC 3′ UTR m1，APC 3′ UTR m2 and APC 3′ UTR m3) dual-luciferase vectors were constructed and then co-transfected into PK-15 cells with miR-135a-5p mimics or negative control (NC)，respectively，and then the luciferase activity was detected.The results showed that miR-135a-5p mimics significantly decreased the luciferase activities of APC 3′ UTR and APC 3′ UTR m2 vectors (P<0.05)，while APC 3′ UTR m1 and APC 3′ UTR m3 completely abolished the inhibitory effects of miR-135a-5p，which demonstrated that miR-135a-5p mainly binded with the first site in 3′ UTR of APC gene.Further analysis revealed that miR-135a-5p inhibited the levels of endogenous APC mRNA and protein in porcine preadipocytes，which indicate that the target gene of ssc-miR-135a-5p is APC gene and regulates its expression.Taken together，this study will provide new insight into the biological function of ssc-miR-135a-5p and its mechanism in regulating adipogenesis.

中图分类号:

S828
S813.3

陈晨，邓缘，任慧波，朱吉，胡雄贵，蒋思文，彭英林. 猪miR-135a-5p预测靶基因APC的鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(4): 534-541.

CHEN Chen，DENG Yuan，REN Hui-bo，ZHU Ji，HU Xiong-gui，JIANG Si-wen，PENG Ying-lin. Identification of APC as the Potential Target of miR-135a-5p in Pigs[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(4): 534-541.

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Identification of APC as the Potential Target of miR-135a-5p in Pigs

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