畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (8): 1006-1011.doi:
吕敏娜,覃宗华,袁建峰,孙铭飞,余劲术,吴彩艳,蔡建平*
LV Min-na, QIN Zong-hua, YUAN Jian-feng, SUN Ming-fei,YU Jin-shu, WU Cai-yan, CAI Jian-ping*
摘要: 在从鸭疫里默氏菌(RA)基因组文库筛选毒力基因的过程中,作者获得了编码RA甲羟戊酸激酶的基因(RAMVA),将该基因片段提交GenBank,收录号为GQ398751。测序分析结果显示其开放阅读框长492 bp,共编码163个氨基酸。根据序列信息设计引物,用PCR方法从RA中扩增出RAMVA的编码区并与表达质粒pMAL-C2X连接,构建重组质粒pMALRAMVA。经限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pMAL-RAMVA转化至E.coli BL21(DE3)构建重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA。用IPTG诱导重组菌成功诱导RAMVA的表达,通过SDS-PAGE分析表达产物,表达量占全菌总蛋白的15.6%,且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在。雏鸭免疫试验表明,接种重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA 2周后,可产生对RA致死量攻击达42.3%的免疫保护率。