畜牧兽医学报 ›› 2008, Vol. 39 ›› Issue (4): 478-482.doi:
田宏,吴锦艳,龚真莉,郑海学,孙世琪,尚佑军,刘湘涛,谢庆阁
TIAN Hong, WU Jin-yan,GONG Zhen-li, ZHENG Hai-xue, SUN Shi-qi,SHANG You-jun, LIU Xiang-tao, XIE Qing-ge
摘要: 从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′ 端引入Kozak序列(Kozak, 1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。