畜牧兽医学报 ›› 2008, Vol. 39 ›› Issue (4): 488-493.doi:
邬向东，曲悦，谌南辉，王萍，何后军
WU Xiang-dong，QU Yue，CHEN Nan-hui，WANG Ping，HE Hou-jun
摘要： 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡，获得产生抗独特型抗体的脾细胞，从中提取总RNA，经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板，根据来航鸡IgG抗体重链（VH）、轻链（VL）可变区基因FR设计引物，进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因（大小分别约为370和320 bp）。通过重叠延伸反应(SOE)，以（Gly4Ser）3为连接肽，将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VL ScFv，将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体M13K07感染后，获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105，噬菌体中ScFv基因的插入率为80%，用辅助噬菌体援救后，得到滴度为1011 PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体（2F9-4/HU2）进行4轮“吸附洗脱扩增”的淘筛，出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体（2F9-4/HU2）特异性结合，并能促进抗体的生产。
