畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (4): 434-441.doi:
王建科,张云德,张强*,吴国华,颜新敏,朱海霞,李健,邵长春,朱彩珠,吴磊
WANG Jianke, ZHANG Yunde, ZHANG Qiang*, WU Guohua, YAN Xinmin,ZHU Haixia, LI Jian, SHAO Changchun, ZHU Caizhu, WU Lei
摘要: 为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P12A3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒 O/China99 毒株的 EGFPP7.5P12A3C 基因整体通过平末端连接到 KpnⅠ酶切后的线性载体 pUC119TK 中,得到重组载体 pUC119TKEGFPP7.5P12A3C。重组载体通过缺失的 TK 基因与羊痘病毒弱毒株在 BHK21 细胞中同源重组,用 EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR 鉴定、抗原捕获 ELISA 试验检测及 Western blot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代 BHK21细胞中稳定传代,扩增出约 3 000 bp片段,并经测序确证为基因 P12A3C;抗原捕获 ELISA 试验检测均为阳性;Western blot 分析表明转移载体 pUC119TKEGFPP7.5P12A3C 在感染的 GTPV AV41 BHK21 细胞中表达的蛋白可被 O型 FMDV 高免血清特异性识别,并具有反应原性。这些结果表明获得了表达 O 型口蹄疫病毒 P12A3C 基因的重组山羊痘弱毒株。