畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (4): 469-477.doi:
范丽,唐青海,张彦明*,刘伟,仝刚
FAN Li, TANG Qinghai, ZHANG Yanming*, LIU Wei, TONG Gang
摘要: 本研究旨在克隆猪细胞周期蛋白A基因(Cyclin A),并在猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)中表达,以验证其功能。以人的Cyclin A基因为信息探针,经电子克隆得到猪Cyclin A基因,通过RTPCR和DNA测序验证电子克隆结果并对其作生物信息学分析,用RTPCR、Western blot研究它在SUVEC中的表达情况。应用激光共聚焦显微镜分析它在细胞中的亚细胞定位,并通过流式细胞仪分析细胞周期以及用MTS法测定细胞的增殖能力。结果如下:核酸测序证明RTPCR产物同电子克隆结果相符。该cDNA包含1 299 bp的完整开放阅读框(ORF),共编码432个氨基酸,经NCBI BLAST分析,该基因定位于猪的8号染色体上。Western blot 结果显示Cyclin A基因编码蛋白的相对分子质量大小约为40 ku,亚细胞定位研究表明该蛋白定位于细胞核中。经流式细胞仪分析表明稳定表达该基因的细胞,其G1期的细胞数量比对照组细胞增加了15%~20%,而S期的细胞数量比对照组细胞减少了约18%;MTS法检测显示细胞株SUVECCycAGFP的增殖活性明显高于对照组细胞。作者成功克隆到新基因猪源细胞周期蛋白A,并验证了其生物学功能,为今后开展病毒感染对猪细胞周期蛋白A影响的研究奠定了基础。