畜牧兽医学报 ›› 2007, Vol. 38 ›› Issue (7): 651-656.doi:
王娉;王启贵;李辉;张富春
WANG Ping;WANG Qi-gui; LI Hui;ZHANG Fu-chun
摘要: 为构建鸡PPAR-γ基因的原核和真核表达载体并制备鸡PPAR-γ的抗血清,根据鸡PPAR-γ基因cDNA序列设计一对引物,采用RT-PCR的方法扩增鸡PPAR-γ基因的cDNA片段并将其分别插入到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中;进而诱导重组原核表达载体pGEX-4T-1/PPAR-γ在大肠杆菌BL21中表达;同时利用重组真核表达载体pcDNA3/PPAR-γ免疫注射小鼠使其产生免疫应答。SDS-PAGE结果显示pGEX-4T-1/PPAR-γ在大肠杆菌BL21中得到了高效的表达。ELISA和Western blot 结果表明,pcDNA3/PPAR-γ免疫小鼠产生了效价较高和特异性较强的抗体。本研究所构建的真核表达载体pcDNA3/PPAR-γ为在细胞水平上研究鸡PPAR-γ基因超表达提供了有力的工具;所获得的重组蛋白和抗血清为在蛋白水平上研究鸡PPAR-γ基因的功能奠定了基础。