畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (11): 1379-1386.doi:
俄广鑫1,刘娣2*,张冬杰2,杨秀琴1,崔羽3,祝继原1,杨少成1,王嘉博1,谢宇彤1
E Guang-xin1, LIU Di 2*, ZHANG Dong-jie2,YANG Xiu-qin1, CUI Yu 3, ZHU Ji-yuan1, YANG Shao-cheng1, WANG Jia-bo1, XIE Yu-tong1
摘要: 本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用 RT-PCR 技术克隆SRPK1 基因 CDS 区域,同时利用反向 PCR(inverse PCR,I-PCR) 技术得到猪部分 SRPK1 的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析 SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点;利用荧光定量 PCR(realtime PCR) 检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况;构建猪骨骼肌损伤模型,研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性。结果,将克隆片段拼接得到长2 499 bp 的大白猪 SRPK1 基因序列,包含了1 968 bp完整 CDS区域,分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质;包括2个P_Kc 结构域,猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高。通过生物信息学方法预测所得 5′UTR 含有多个转录结合位点:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SP1 MyoD、USF、E47、p300、CP2、RREB-1、E2F和AP-1。利用荧光定量PCR研究发现,表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性,主要都是在胃、大肠和小肠中表达。SRPK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低。5′UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点,主要在消化系统组织表达,在骨骼肌修复中表达上调,推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关。