畜牧兽医学报

拷贝数变异及其研究进展

刘欣;王立刚;王立贤

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 927-931. doi:

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拷贝数变异作为遗传变异的一种新来源在表型多样性和进化中起着重要作用，引起了研究者广泛的兴趣。拷贝数变异（copy number variation ,CNV）是指大小从kb到Mb范围内亚微观DNA片段的变异。CNV在人类正常个体和许多模式动物中已经做了很多的研究工作，并通过生物信息学和杂交的方法确定了CNV的区域。进一步研究发现拷贝数变异与疾病的致病机理有着密切的联系。本文从概念、检测方法和研究进展方面对CNV进行了较为全面的介绍与阐述，分析了目前CNV研究存在的一些问题，并对它在疾病和其他方面的前景做出一些展望。

应用21个微卫星标记监测马身猪遗传多样性变化趋势

曹果清;李步高;石建中;刘宏;薛尚军;周忠孝

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 932-938. doi:

摘要 ( 1061 )

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本研究旨在通过对不同年份马身猪群体遗传多样性变化趋势分析，评价马身猪保种效果，制定有效的保种措施。选用FAO-ISAG联合推荐的21个微卫星标记分析不同年份马身猪群体的遗传多样性。结果表明，在马身猪群体中，共检测到105个等位基因，平均等位基因数为5个，平均有效等位基因数为2.244 0，平均观察杂合度和PIC分别为0.317 6和0.391 9。从1999年到2007年，平均等位基因数从4.285 7下降到3.428 6，平均有效等位基因数从2.509 5下降到1.977 0，平均观察杂合度从0.311 6下降到0.298 1，平均多态信息含量从0.441下降到0.341。马身猪群体基因纯度较高，遗传多样性有逐年降低趋势，在今后的保种和利用工作中，应对马身猪群体的遗传多样性进行实时监测，在世代更替中注意低频率等位基因的保护。

鹅Perilipin基因部分片段的克隆、不同品种及填饲对组织mRNA表达水平的影响

潘志雄;王继文;唐慧;向梳瑕;王静;吕佳;杨超;韩春春

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 939-943. doi:

摘要 ( 1026 )

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本研究旨在克隆鹅围脂滴蛋白（Perilipin）基因，并探讨填饲对其在四川白鹅和朗德鹅肝脏中表达的影响，为从脂滴角度研究鹅肥肝分子机理提供依据。试验选取12只朗德鹅和12只四川白鹅为研究对象，通过RT-PCR方法扩增鹅Perilipin基因部分序列，采用实时定量技术研究了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况，最后检测填饲后两品种鹅肝脏总脂质含量、甘油三酯（TG）水平、肝质量以及Perilipin基因表达变化。结果表明：获得的鹅Perilipin基因序列与原鸡的同源性最高，与哺乳动物的同源性也达到70%以上；从组织表达上看，该基因主要表达于腹脂和皮脂，而在其他组织几乎不表达；填饲引起鹅肝脏Perilipin mRNA表达丰度的极显著增加（P<0.01），且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关；此外，填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅（P<0.05）。结果提示：填饲会引起Perilipin mRNA在鹅肝脏中表达丰度的极显著增加（P<0.01），且其增加幅度存在着品种间差异（P<0.05）。

DRD2基因14个多态位点与鸡产蛋性状的相关性

徐海平;周敏;方梅霞;曾华;聂庆华;张德祥;张细权

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 944-950. doi:

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本研究旨在分析DRD2基因与鸡产蛋性状的相关性，寻找可作为鸡产蛋性状的重要标记。在该基因上选取了14个多态位点，采用PCR-RFLP及PCR测序等方法在宁都三黄鸡母系644个个体中进行了鸡产蛋性状的关联分析。结果表明：位于该基因5′调控区的4个突变位点G38560C、T-38326G、T-32751C和A-16105G与鸡的开产日龄显著或极显著（P<0.05或P<0.01）相关，位点A-16105G还与300日龄总产蛋数显著相关（P<0.05）；由G38560C、G-38544A、I-38463D与T-38326G这4个位点组成的单倍型块与开产日龄呈极显著相关（P=0.006 5<0.01）。研究结果提示：G-38560C、T-38326G、T-32751C和 A-16105G这4个突变位点以及由G-38560C、G-38544A、I-38463D与T-38326G组成的单倍型块可作为产蛋性状标记辅助选择的有效分子标记。

ActRIIB基因单核苷酸多态性与小尾寒羊多脊椎变异的关联研究

刘建明;孙少华;韩立霞;李雪梅;孙志颖

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 951-954. doi:

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本研究旨在检测ActRIIB基因多态性与河北小尾寒羊脊椎数变异的关系。利用单核苷酸多态性（SNP）分析技术，设计特异性引物扩增小尾寒羊ActRIIB基因片段，选取不同胸腰椎数表型个体进行PCR扩增产物测序。在扩增片段的85位点发现C/T的单核苷酸突变，该突变引起MspⅠ酶切位点消失。经限制性内切酶MspⅠ酶切，在群体中得到3种基因型，即AA、AB和BB型，其中BB基因型为纯合型突变。经过卡方检验，不同表型个体基因型频率差异显著（P<0.05）。纯合突变型仅分布在表型为13胸椎6腰椎(T13L6)和T14L5个体中，在T14L5表型个体中频率最高。由结果推断该突变可能对于小尾寒羊第1腰椎变异为第14胸椎起到一定的作用，同时还发现了绵羊该基因内含子4上的一个点突变对小尾寒羊脊椎的发育有影响。

高繁殖力黄淮山羊大卵泡颗粒细胞上调表达基因的研究

庞训胜;王子玉;应诗家;张艳丽;吴勇聪;闫益波;孟立;钟部帅;王锋

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 955-961. doi:

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旨在对山羊卵巢有腔卵泡发育中基因表达特点进行研究。本研究应用抑制消减杂交技术(SSH)对黄淮山羊卵泡期卵巢非闭锁大卵泡（6 mm）和小卵泡（4 mm）颗粒细胞内差异表达基因进行了研究，建立了消减cDNA文库，通过斑点杂交分析，从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选，结果发现，其中有8个与已知功能基因高度相似，12个全新的表达序列标签(EST)。结果显示，这些基因可能影响着山羊卵泡的发育成熟和排卵。

Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响

付博;马红;;任亮;赵金凤;房庆昌;郭镇华;李忠秋;刘娣;

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 962-966. doi:

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本研究旨在探讨Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响。收集屠宰场废弃卵巢，抽取卵母细胞。采用电激活联合化学激活的方法得到孤雌胚胎,同时用所得的卵母细胞与卵丘细胞构建猪体细胞核移植重构胚；并将所得的孤雌胚、核移植重构胚移入NCSU-23 (培养液)中与Vero细胞共培养。结果， Vero细胞共培养组的囊胚率显著高于对照组(P<0.05)，各组囊胚细胞数无显著差异(P>0.05)。结果表明，Vero细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于猪胚胎的早期发育。

中国美利奴绵羊肉用品系生长轴相关基因表达对其十二指肠发育的影响

周其伟;白春生;贾斌;蒋文生;蒋松;杜迎春;李仁燕;温青娜;吕利民

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 967-973. doi:

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本文旨在探讨生长轴基因与羔羊十二指肠生长发育的关系。分别于0、7、14、30、60 和90日龄随机选取健康的中国美利奴绵羊（新疆军垦型）肉用品系雌、雄各3只，测定体质量后屠宰，迅速采集其脑垂体、肝脏和十二指肠等组织样品，并测量十二指肠长度。用荧光实时定量PCR法分别测定脑垂体中生长激素(GH)和生长激素释放激素受体(GHRHR)，肝脏和十二指肠中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R) 基因表达的发育性变化，并进行了性别间比较。结果表明，羔羊肝脏中GHR基因和十二指肠中GHR、IGF-1基因表达mRNA丰度的变化模式与垂体中GH和GHRHR基因表达mRNA丰度的变化发育模式相似，呈先升高后逐渐下降的趋势，但这种趋势有一定的时差性；十二指肠的日增长发育性变化模式与肝脏中IGF-1基因表达的变化模式相似。结果提示，十二指肠的发育性变化主要受到肝脏中产生的IGF-1内分泌作用的调控，同时也可能受到脑垂体中GH内分泌的直接作用。

开食料中玉米和全脂大豆的蒸汽压片或膨化处理对犊牛瘤胃挥发酸比例和细菌区系的影响

张元庆;孟庆翔;贺东昌;杨效民;王芳;张红岗;上官明军;张变英

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 974-980. doi:

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试验选用12头荷斯坦公犊（(21±3) d）研究开食料中玉米和全脂大豆的蒸汽压片或膨化处理对犊牛瘤胃发酵和细菌区系的影响。犊牛随机分为3组，采食3种开食料。开食料原料组分相同，据其中玉米和大豆的加工方式分为3个处理组：膨化处理组（PCON）、蒸汽压片组（SFCS）及常规粉碎组（对照组，NCON）。试验期为10周，每周或每2周采集犊牛瘤胃液测定pH和挥发性脂肪酸（VFA）含量及其组成，并用变性梯度凝胶电泳法（PCR-DGGE）测定细菌区系的组成。结果表明，瘤胃中总VFA浓度在第6和第9周受日粮中原料加工方式的影响，但未达显著水平（P＞0.05）。SFCS组犊牛瘤胃中的丁酸摩尔比例在第5和第11周较其它2组犊牛高（P<0.05）。PCR-DGGE结果表明，3组犊牛瘤胃中的细菌种群随年龄增长的组成情况基本一致，但SFCS组犊牛瘤胃中细菌的组成较其他2组相对复杂。结果提示：与其它2组相比，蒸汽压片处理有助于犊牛瘤胃的发酵和发育。

蜂花粉及其多糖对犊牛体增质量、物质消化与血清指标的影响

张国锋;刁其玉;屠焰;闫继红;张乃锋

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 981-987. doi:

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研究蜂花粉及其多糖对14～70日龄犊牛生长性能、营养物质消化率和血清生化指标的影响。试验选用25头新生荷斯坦犊牛，随机分成5组，每组5头牛，分别是饲喂蜂花粉10 g·d^-1（10BP）组、25 g·d^-1（25BP）组、50 g·d^-1（50BP）组、蜂花粉多糖5 g·d^-1（5PS）组和对照（C）组，试验期56 d，用全收粪法在犊牛21～28和42～49 d进行两期消化试验。结果表明：25BP和5PS组犊牛全期平均日增体质量显著高于C组（P<0.05)；25BP组F/G改善了12.85%（P<0.05)；在犊牛21～28 d时，25BP和5PS组分别提高干物质（DM）表观消化率8.38%和7.66%，显著高于C组和50BP组（P<0.05)，25BP组提高粗蛋白（CP）表观消化率18.03%（P<0.05)；在血清生化指标中，添加蜂花粉和多糖组犊牛70 d时，血清总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）有增加趋势，尿素氮（BUN）和总胆固醇（CHO）有降低趋势，甘油三酯（TG）各处理组降低显著（P<0.05)。代乳粉中添加蜂花粉及其多糖可提高犊牛生长性能及对干物质和粗蛋白的表观消化率，改善饲料转化率和降低血清甘油三酯水平，并有提高血清总蛋白和白蛋白含量的趋势。蜂花粉添加量为25 g·d^-1，蜂花粉多糖添加量为5 g·d^-1水平时，犊牛生长性能和营养物质消化率有明显的改善。

鹅细小病毒VP3蛋白B细胞线性表位的精确定位

郭鹭;鞠环宇;于天飞;荆志强;马波;王君伟

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 988-994. doi:

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本试验旨在利用获得的4株抗鹅细小病毒(GPV) VP3的单克隆抗体，进一步对GPV VP3 B细胞线性抗原表位精确定位。根据笔者实验室已鉴定的线性抗原表位区结果，筛选出单抗所针对的优势抗原表位区。设计并合成互相重叠5 aa的10 aa短肽寡聚核酸片段，退火后，连入pET-32a载体，经转化鉴定，诱导表达后，获得相应的小片段融合蛋白，并利用单抗通过Western blot进行抗原性鉴定。同样方法进行短肽片段两端氨基酸的逐个缺失设计，进一步精确定位，结果鉴定出2个抗原表位，分别为430-435 aa和643-647 aa。

小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用

翟军军;窦永喜;张海瑞;毛立;蒙学莲;王秋霞;骆学农;才学鹏

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 995-1000. doi:

摘要 ( 692 )

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本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达，并利用表达的蛋白制备抗血清，然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导，用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化，确定了P蛋白在28 ℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol·μL^-1的条件下诱导6 h，可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白，然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠，制备了多克隆抗体，其滴度最高可达1∶25 600，而且特异性好，表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达，并制备了特异性好、滴度高的抗血清，为研究P蛋白功能奠定了基础。

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用

张坤;何启盖

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1001-1005. doi:

摘要 ( 1022 )

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本试验旨在建立能同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪A群轮状病毒(GAR)的多重RT-PCR检测方法。根据GenBank收录的PEDV M基因、TGEV N基因、GAR VP7基因，利用软件Primer 5.0设计合成能分别特异性扩增PEDV、TGEV、GAR相应基因的引物。利用这3对引物，作者建立了一种新的能够同时检测PEDV、TGEV和GAR的多重RT-PCR方法，并将这种方法和常规的RT-PCR进行了比较。实验室检测中，多重RT-PCR检测方法能够检测到35 pg的 TGEV-PEDV-GAR三联苗的混合RNA。应用该方法检测了华中地区75份腹泻猪粪样，同时利用常规RT-PCR检测方法对该检测方法的敏感性和特异性进行了分析，结果表明该方法检测PEDV、TGEV、GAR的敏感性分别为92%、100%、100%，特异性均为100%。该方法敏感性高、特异性强，是一种新的检测PEDV、TGEV和GAR的方法。

鸭疫里默氏菌甲羟戊酸激酶基因的重组表达与免疫保护效果研究

吕敏娜;覃宗华;袁建峰;孙铭飞;余劲术;吴彩艳;蔡建平

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1006-1011. doi:

摘要 ( 643 )

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在从鸭疫里默氏菌（RA）基因组文库筛选毒力基因的过程中，作者获得了编码RA甲羟戊酸激酶的基因（RAMVA），将该基因片段提交GenBank，收录号为GQ398751。测序分析结果显示其开放阅读框长492 bp，共编码163个氨基酸。根据序列信息设计引物，用PCR方法从RA中扩增出RAMVA的编码区并与表达质粒pMAL-C2X连接，构建重组质粒pMALRAMVA。经限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pMAL-RAMVA转化至E.coli BL21(DE3)构建重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA。用IPTG诱导重组菌成功诱导RAMVA的表达，通过SDS-PAGE分析表达产物，表达量占全菌总蛋白的15.6%，且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在。雏鸭免疫试验表明，接种重组表达菌E.coli BL21/pMAL-C2X-RAMVA 2周后，可产生对RA致死量攻击达42.3%的免疫保护率。

布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

孟茹;陈创夫;张辉;乔军;任艳;王正荣;蒋松

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1012-1017. doi:

摘要 ( 666 )

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本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合，建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法，对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验，并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳，该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88~89 ℃，结核杆菌Tm值为90~91 ℃，对其他供试的菌株则为阴性；该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝·μL^-1，结核杆菌为50拷贝·μL^-1，两病原都存在时为100拷贝·μL^-1，比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR，对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测，符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌，并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。

Real-Time PCR和组织原位杂交法检测enJSRV在绵羊胎儿免疫器官及肺脏中的表达

吴晓莉;齐景伟;刘淑英;徐萌杰

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1018-1023. doi:

摘要 ( 601 )

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本研究旨在揭示感染JSRV病羊体内检测不到循环抗体的免疫学机理。用地高辛（DIG）标记制备enJSRV-env探针，原位杂交法检测妊娠70 d的绵羊胎儿（免疫器官初步形成期）、妊娠130 d胎儿（即将出生的）和出生7日龄羔羊的胸腺、脾脏、肠淋巴结和肺脏内enJSRV mRNA表达情况。并利用Real-Time PCR法，对enJSRV mRNA在以上组织中的表达进行定量分析。结果表明，在所检测组织内均有阳性信号出现，而阴性对照组均没有阳性信号；enJSRV mRNA在胎儿和初生羔羊各免疫器官高水平表达，特别是在妊娠130 d胎儿和初生7日龄羔羊的胸腺和脾脏中表达水平比较高，而在各时期的肺脏组织中都检测到低水平表达。本试验结果为机体对exJSRV的感染产生免疫耐受这一假说提供了有力的证据。

Ghrelin在BALB/c小鼠胸腺中的定位分布与发育性表达

李英;李玉谷;叶远兰;张媛;马勇江

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1024-1030. doi:

摘要 ( 665 )

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本试验应用免疫组织化学方法和显微图像分析技术，探讨了Ghrelin在1、3、5、6、12月龄BALB/c小鼠胸腺中的定位分布和发育性表达规律。结果表明，Ghrelin免疫阳性反应主要分布于胸腺髓质内，而胸腺皮质中较少。Ghrelin阳性细胞类型包括被膜下胸腺上皮细胞、星形胸腺上皮细胞、髓质胸腺上皮细胞、胸腺小体上皮细胞、巨噬细胞、胸腺髓质的部分淋巴细胞，可能还有胸腺树突状细胞。Ghrelin在小鼠胸腺中的表达量，1、3月龄之间差异不显著（P＞0.05），5、6月龄之间差异也不显著（P＞0.05），但5、6月龄显著低于1、3月龄（P＜0.05），而12月龄又显著低于5、6月龄（P＜0.05）和极显著低于1、3月龄（P＜0.01），即随着年龄的增长，胸腺中的Ghrelin表达量逐渐减少。结果提示，胸腺的年龄性退化可能与Ghrelin的表达量下降有关。

高钼对艾维茵肉鸡法氏囊细胞周期和凋亡影响分析

杨帆;崔恒敏;肖杰;彭西;崔伟;程安春;陈涛;柏才敏

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1031-1038. doi:

摘要 ( 699 )

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300只1日龄艾维茵肉鸡健雏随机分为4组，分别饲以对照日粮（Mo 13 mg·kg^-1）和高钼日粮(Mo 500 mg·kg^-1，高钼Ⅰ组；Mo 1 000 mg·kg^-1，高钼Ⅱ组；Mo 1 500 mg·kg^-1，高钼Ⅲ组)6周，以实验病理学和流式细胞术的方法观察雏鸡法氏囊变化。结果，高钼Ⅱ、Ⅲ组法氏囊绝对质量和脏器指数显著低于对照组。组织学观察见法氏囊淋巴细胞减少，网状细胞增生。超微结构观察，淋巴细胞线粒体肿胀、嵴断裂，或见线粒体基质电子密度增高；凋亡淋巴细胞增多。流式细胞结果显示，28和42日龄时高钼Ⅱ、Ⅲ组法氏囊淋巴细胞G0/G1期显著升高（P<0.01），S期、G2+M期和增殖指数（PI）显著降低（P<0.01），同时凋亡率显著高于对照组（P<0.01），TUNUL染色观察结果与流式细胞仪检测结果一致。结果表明，日粮钼含量为1 000及1 500 mg·kg^-1时可抑制法氏囊生长发育。

奶牛围产期血清脂肪代谢、肝脏功能和氧化指标的变化

熊桂林;付志新;曹随忠;顾建红;陈大伟;刘宗平

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1039-1045. doi:

摘要 ( 1098 )

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选择产前30 d的奶牛30头，分别在产前30、20、10、5、0 d和产后5、10、15、20 d采集血清，检测脂肪代谢指标（TG、Chol、NEFA、HDL、LDL含量）、肝脏功能指标（AKP、LDH、ALT、AST活性）和抗氧化、脂质过氧化指标（GSHPx、SOD、CAT活性和MDA含量）。结果表明：①血清TG和Chol含量产前呈降低趋势，TG含量产犊当天急剧下降，Chol含量产后逐渐升高；血清NEFA含量产前变化不明显，产犊当天急剧升高，产犊5 d开始降低；血清LDL和HDL水平产前呈降低趋势，产后逐渐升高。②血清LDH和AST活性在产前5 d或产犊当天开始升高，产犊5 d后逐渐降低；ALT和AKP活性各时间段变化不明显。③血清CAT和GSH-Px活性在产前呈降低的趋势，产犊当天升高，之后逐渐降低；血清SOD活性产前呈升高趋势，产犊当天达到最高峰，之后逐渐降低；血清MDA含量在产前5 d开始升高，产犊5 d后逐渐降低。表明奶牛围产期发生脂肪动员和氧化状态失衡。

子宫内膜炎患牛子宫内膜组胺浓度与MC颗粒状态的研究

王国卿;王洪海;张乃生;王海霞

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1046-1048. doi:

摘要 ( 672 )

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本研究旨在探讨子宫内膜肥大细胞（MC）颗粒状态和组胺浓度在奶牛子宫内膜炎中的作用。选用产后6～10 d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛各10头，分别为对照组和试验组，通过ELISA法检测子宫内膜组胺浓度和透射电镜观察子宫内膜MC颗粒状态。结果表明：试验组子宫内膜组织中组胺含量为（80305±4.002） ng·mL^-1 ，对照组为（39.204±4.278） ng·mL^-1 ，二者差异极显著（P<0.01）；对照组子宫内膜固有层MC胞质中可见大小不等，圆形或椭圆形颗粒，均匀分布；而试验组子宫内膜固有层MC呈脱颗粒状态，表现为颗粒数量减少、分布和浓度不均、周腔增大、有空泡形成。结果提示，产后发生急性子宫内膜炎时子宫内膜MC脱颗粒，释放组胺，使子宫内膜组胺含量显著升高，这与子宫内膜的急性炎症有关，组胺可调节子宫免疫机能，可能对子宫内膜炎的发生发展具有重要作用。

猪星状病毒SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

商晓桂;郭伟;杨莲茹;杨志彪;华修国;朱建国;崔立

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1049-1053. doi:

摘要 ( 592 )

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本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列，设计并合成1对引物，通过PCR扩增ORF2基因片段，将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α，经测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线，并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明，猪星状病毒荧光定量PCR的标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系，熔解曲线特异，灵敏度可达1×101拷贝，是普通PCR检测方法的100倍，特异性和重复性较好。本次建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法具有快速、简便、敏感等优点，有重要的实用价值。

10株鸭源新城疫病毒的分离鉴定及F基因遗传进化分析

孙杰;刁有祥;李建侠;吴焕荣;颜贇;杨建朋;李瑶瑶

畜牧兽医学报, 2010, 41(8): 1054-1060. doi:

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为调查山东省鸭群中新城疫病毒（NDV）的流行情况，对2007—2009年山东不同地区发病鸭群进行了NDV的分离鉴定，并对分离的10株鸭源NDV进行了生物学特性和遗传特性研究。结果显示：10株鸭源NDV的致病指数MDT和ICPI测定结果分别为50.4～60.0和1.66～1.78，表明10株分离株均属强毒株。致病性试验显示，3株代表毒株对不同日龄雏鸭均具有较强的致病性，发病率和死亡率分别达70%～100%和20%～70%。对F基因序列分析表明，相对于基因Ⅰ～Ⅵ型NDV，10株鸭源NDV F蛋白存在较大变异，这些变异主要集中在1—30、101—124、479—494和509—516 aa处，且在52、71、176、272、314、402和489位出现了与近几年流行毒株一致的氨基酸替代。核苷酸同源性分析结果表明，10株鸭源NDV之间同源性在95.8%～99.9%，与2000年以来国内外分离的基因Ⅶ型NDV同源性较高，在95.7%～99.8%，与传统LaSota、F48E9同源性较低，为83.8%～90.9%。遗传进化分析结果显示分离毒株均属于基因Ⅶd型。此外，10株鸭源NDV还具有大多数鹅源NDV所特有的973位和1 249位RsaⅠ位点。上述结果表明基因Ⅶd型NDV是造成我国鸭群近年来发生新城疫的主要病原，鸭源NDV很可能源于早期的鹅源NDV。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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