畜牧兽医学报

Cdc25B mRNA在早期鸡胚中的动态表达

张晖;覃君慧;柳金雄;冯亚玫;陈秋生

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 157-162. doi:

摘要 ( 708 )

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本试验旨在研究Cdc25B mRNA在早期鸡胚中的时空表达模式。通过分子克隆的方法获得Cdc25B基因特异性目的片段，并用体外转录的方法合成了Cdc25B RNA探针，通过全胚胎原位杂交的方法检测了早期不同发育阶段鸡胚中的Cdc25B mRNA水平。结果表明，Cdc25B的杂交信号主要分布于中枢神经系统(CNS)、体节和肢芽的顶端,在尾部神经上皮中缺乏杂交信号。早期阶段，Cdc25B 的杂交信号不对称地分布在亨氏节的左侧。随着胚胎的发育，Cdc25B 的杂交信号逐渐增强，并且在即将封闭的神经管中，杂交信号呈现出腹背递减的浓度梯度。然而，在早期各个阶段，脊索都是阴性的。这些结果提示，Cdc25B在前、后期的CNS、体节和肢芽发育中可能发挥不同的功能，这种功能的改变可能与Cdc25B的表达浓度有关。此外，鸡胚胎内部器官的左右不对称性发育可能是Cdc25B与其它基因共同调控的结果，这些调控发育的机制可能是Cdc25B蛋白参与了细胞周期进程，调控细胞增殖或分化。

应用微卫星DNA标记分析荷斯坦母牛系谱可靠性及影响因素

初芹;张毅;孙东晓;俞英;王雅春;张沅

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 163-168. doi:

摘要 ( 995 )

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为了评估当前中国荷斯坦牛群体的系谱准确性，本研究选择15头种公牛及来自21个牛场的2 220头女儿牛，借助牛3号染色体（BTA3）上17个微卫星标记，对女儿-公牛标记基因型是否错配进行分析。结果，按照错配标记数大于等于3个为系谱错误的标准，本研究所涉及的母牛群中系谱错误率为16.62%。经对影响系谱错误的因素分析表明，场效应是主要的影响因素，不同场间系谱错误比例差异较大；由于公牛女儿在各牛场中分布不均匀，导致公牛效应也达到显著。研究结果提示在中国荷斯坦牛群体进行亲子鉴定是亟需和必要的。

利用微卫星和SNP标记信息进行奶牛亲子鉴定的模拟研究

周磊;初芹;刘林;刘剑锋;王雅春;张沅

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 169-176. doi:

摘要 ( 1082 )

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本研究旨在比较微卫星标记和单核苷酸多态（SNP）标记进行奶牛亲子鉴定的效率。研究中随机模拟了10 000对含微卫星或SNP标记信息的非亲子关系的个体，用排除法进行亲子鉴定，该过程重复100次。结果表明，标记的多态性对于排除概率的影响最大。达到同样的排除概率，所需低多态标记数量远高于高多态标记。当真实母亲基因型已知时，个体父亲的推断效率较高。达到同样的排除概率，无论标记多态性高或低，3种鉴定类型所需SNP标记数量均大于微卫星标记。当SNP和微卫星标记的平均杂合度为0.484和0.875时，需要的SNP标记数是微卫星标记的5～6倍；当SNP和微卫星标记的平均杂合度为0.363和0.566时，需要的SNP标记数约是微卫星标记的2倍。在2种标记中，达到同样排除概率（大于0.99），采用至少2个矛盾推断原则推断所需标记数为单个矛盾推断原则的1.45倍。结果表明，由于SNP标记具有误判率低、重复性高和易于高通量自动化检测等特点，随着检测成本降低，SNP标记将来完全有可能取代微卫星标记用于奶牛群体的亲子鉴定。

山羊PTHrP基因的多克隆抗体制备和组织表达图谱分析

郑惠玲;杨振宇;祝珍珍;安俊辉;邢瑞芳

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 177-181. doi:

摘要 ( 703 )

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旨在获得山羊PTHrP多克隆抗体，检测其在山羊各组织中的表达图谱，以便进一步研究山羊PTHrP的功能。本研究构建山羊PTHrP基因的原核表达载体，转化E-coli BL21(DE3)菌株，IPTG诱导表达获得融合蛋白， SDS-PAGE电泳检测融合蛋白，然后将融合蛋白纯化后多点免疫大耳白兔，制备多克隆抗体，最后使用Western blot检测PTHrP在山羊各组织中的表达。结果，酶切和测序显示原核表达载体构建成功；SDS-PAGE电泳结果说明融合蛋白(约36.5 ku)被成功纯化；间接ELISA检测所制备的抗体效价达1∶51 200；表达谱显示PTHrP在山羊乳腺、肾脏、垂体、脑、心脏、肝脏、骨、肌肉、脾脏等组织中均有表达。本研究成功制备了山羊PTHrP的多克隆抗体，发现PTHrP在山羊各组织中广泛表达。

羔羊卵泡诱导发育、活体采卵和体外发育潜能研究

胡鹏飞;张贵学;于国庆;吴增华;李向臣;关伟军

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 182-189. doi:

摘要 ( 674 )

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本研究旨在探讨聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl pyrrolidone, PVP)作为缓释剂在羔羊卵泡诱导发育中的应用效果，以及品种、年龄、激素剂量和超排次数对活体采集卵母细胞数量和体外发育能力的影响。选用4～12周龄无角道塞特、萨福克母羔120只，分为15%PVP一次肌注组、30%PVP一次肌注组和常规递减注射组，每组40只，注射剂量均为120 IU，对30%PVP一次肌注组按品种、周龄、激素剂量和重复次数分为3~4小组，分别进行卵泡诱导发育和活体采卵，并与屠宰厂采集的卵母细胞对比进行体外受精和胚胎移植。结果表明，采用30% PVP缓释FSH进行羔羊超排，可以起到与常规超排一致的效果，二者差异不显著（P>0.05），但采用15% PVP缓释FSH进行羔羊超排没有取得理想的效果，在各项指标上均显著低于30% PVP组和常规递减注射组（P<0.05）；采用30% PVP缓释FSH分别超排道塞特和萨福克羔羊，只均获卵数和可用卵数差异不显著（P>0.05），4、6和8周龄羔羊只均获卵数和可用卵数显著高于12周龄羔羊组（P<0.05），40 IU组只均获卵数显著低于80、120和240 IU剂量组（P<0.05），240 IU剂量组只均获卵数最高，但与120 IU剂量组相比差异不显著（P>0.05），重复超排后只均获卵数和可用卵数显著低于初次超排（P<0.05），同时超排成功率也显著下降（P<0.05）；与屠宰场采集的卵母细胞相比，活体采集的羔羊卵母细胞体外成熟率、卵裂率、桑椹胚率和囊胚率均较低（P<0.05），但受精率二者差异不显著（P>0.05）；分别冷冻保存了95和140个羔羊体外受精胚胎与屠宰场体外受精胚胎，复苏后存活率分别为95.8%和94.3%，随后进行了胚胎移植，移植后的妊娠率二者差异不显著（P>0.05），分别产羔2和7只。结果提示，采用30%PVP缓释技术进行羔羊卵泡诱导发育，可以取代常规的递减注射法；年龄、激素剂量和超排次数影响活体采集的卵母细胞数量，4周龄的道塞特羔羊采用30%PVP缓释120 IU FSH可得到最高的只均获卵数和可用卵数，活体采集的羔羊卵母细胞可经体外受精和胚胎移植获得后代，具有与屠宰场采集的成羊卵母细胞相同的体外发育能力。

鸭FST基因编码区克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

刘贺贺;金海波;王继文;曹伟;韩春春;李亮;许峰

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 190-195. doi:

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本研究旨在获取鸭卵泡抑素（FST）外源蛋白以及进一步深入了解其在肌肉发育和繁殖上的作用,采用RT-PCR方法从鸭卵巢中克隆鸭FST基因CDS序列，并将编码FST成熟蛋白的核酸片段连入原核表达载体pET-32a（+）中，转化大肠杆菌(Escherichia coli)并采用IPTG进行诱导，诱导后的蛋白经SDS-PAGE分析后用蛋白免疫技术鉴定。序列分析表明，FST基因编码区序列为1 032 bp，编码343个氨基酸，其中信号肽由28个氨基酸组成，成熟蛋白具有4个保守结构域：N-domain、DomainⅠ、DomainⅡ和Domain Ⅲ，其中DomainⅠ与鼠DomainⅠ结构较相似，DomainⅡ和DomainⅢ差异很大。SDS-PAGE电泳结果显示表达出的融合蛋白为52 ku，免疫鉴定结果呈阳性。结果表明，FST基因在3个功能结构域上存在差异，推测DomainⅠ主要与其肌肉发育有关，而DomainⅡ、DomainⅢ与鸭繁殖关系密切。本研究成功获取了鸭卵泡抑素蛋白，为进一步研究卵泡抑素在鸭肌肉发育以及繁殖中的功能奠定了基础。

饲粮结构与非结构性碳水化合物比例对绵羊瘤胃代谢参数的影响

吴秋珏;;郝正里;李发弟;;叶得河;郑琛;张晓庆;李勇

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 196-202. doi:

摘要 ( 644 )

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旨在探讨绵羊饲粮结构与非结构性碳水化合物比例（SC/NSC为1.57（Ⅰ）、1.95（Ⅱ）、2.29（Ⅲ））对瘤胃发酵参数（pH、VFA、总氮、NH3N、尿素氮、蛋白氮）的影响。选用6只约1.5岁，体质量25～30 kg，装有瘤胃瘘管的甘肃高山细毛羊羯羊，按3×3重复拉丁方设计（预试期10 d，正试期9 d）。结果表明：采食饲粮Ⅰ的绵羊瘤胃液pH平均值显著低于采食饲粮Ⅱ（P<0.01）、Ⅲ（P<0.05）的绵羊；除处理Ⅰ采食后3 h的 pH较低（5.86）外，所有pH测值均在6.2～7.0范围内。瘤胃液TVFA平均值（mmol·L^-1）呈现Ⅰ、Ⅱ高于Ⅲ的趋势（P=0.09）；处理间乙、丙及其他酸的摩尔比和乙酸/丙酸比均值无显著差异（P>0.05），Ⅰ的丁酸摩尔比均值显著高于Ⅲ（P<0.05）。瘤胃液总氮和蛋白氮均值随SC/NSC值增高而显著下降（P<0.01或P<0.05）；氨氮与尿素氮均值在处理间无显著差异（P>0.05）。结果显示，饲粮粗料份额高于60%时，随SC/NSC值增高，绵羊瘤胃液pH上升，TVFA、总氮和蛋白氮平均浓度下降，对氨氮与尿素氮浓度则无显著影响。

反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立

王婧;李昌;李林溪;胡博;丛艳昭;任大勇;王卓越;杜寿文;金宁一;

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 203-209. doi:

摘要 ( 996 )

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本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒（HIV-1）衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1 核心蛋白基因gag 和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo，构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP，并与含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK293T细胞，包装出的反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白EGFP表达，验证HIV-1核心蛋白Gag表达，G418抗性筛选阳性细胞。结果表明，HIV-1核心蛋白Gag和增强型绿色荧光蛋白可在SP2/0细胞中稳定表达，HIV-1核心蛋白gag基因稳定表达细胞系成功建立，为抗AIDS治疗用基因工程制剂及靶向药物的活性检测提供了理想方法。

Asia1型口蹄疫病毒含RSD受体识别位点感染性克隆的构建与病毒拯救

李平花;白兴文;孙普;卢曾军;曹伟军;谢宝霞;吴润;殷宏;刘在新

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 210-216. doi:

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口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV）具有高的突变率和很强的适应性，在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境，这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不同宿主传代后产生含RSD和RDD受体识别基序的变异株，为了研究含RDD受体识别基序的FMDV在受体结合位点内1个氨基酸的变化是否影响感染性病毒子的产生，作者利用已构建的含RDD受体结合位点的FMDV Asia1/JS/China/05株的全长感染性cDNA克隆为骨架，采用融合PCR方法，构建了该毒株含RSD受体位点的全长cDNA克隆pFMDV-RSD。线性化的pFMDV-RSD重组质粒和表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞，56 h后可观察到典型的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光试验、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析，结果证实该毒株细胞受体位点1个氨基酸的替换不影响活病毒的拯救。该试验为进一步研究含RSD受体结合位点FMDV的生物学特性奠定了基础。

一株H11N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

赵坤坤;张妍;段志强;钟蕾;朱艳梅;赵国;刘晓文;刘文博;刘秀梵

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 217-223. doi:

摘要 ( 1075 )

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为了解禽流感病毒在华东地区家禽体内的进化情况，作者对华东地区某活禽市场的家禽进行了禽流感病毒的流行病学监测，并分离鉴定出1株H11N2亚型禽流感病毒A/duck/Jiangxi/k0701/2009。对该株病毒全基因组的遗传进化分析表明A/duck/Jiangxi/k0701/2009的8个基因片段来源广泛，与亚洲及欧洲某些地区的毒株存在广泛的重组现象。其PB2基因和NS基因可能由A/mallard/Korea/GH170/2007（H7N7）提供，NA基因与高致病性禽流感病毒A/duck/Hebei/0710/2009（H5N2）的NA基因亲缘关系较近，而PB1、PA和NP基因则可能与A/Muscovy duck/Thailand/CULM1984/2009（H4N9）有共同来源。本研究结果提示该株病毒可能为1株多元重组病毒，且可能在高致病性禽流感病毒的进化中起了重要作用。

皖南黄肉种鸡种蛋中禽白血病病毒的感染状态检测

王波;李清源;刘绍琼;张永光;崔治中;孙淑红;

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 224-227. doi:

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本研究首次通过检测种蛋中禽白血病病毒(ALV)评价了皖南黄父母代肉种鸡的ALV感染状态。收集该鸡群的120枚鸡蛋，取40枚鸡蛋孵化至9~11 d后分别制备CEF，培养10 d，取细胞上清用ELISA试剂盒检测ALV p27抗原。另取80枚鸡蛋卵白直接检测p27抗原，同时分别将80枚鸡蛋卵白接种CEF（DF1），培养10 d后取细胞上清检测p27抗原。比较p27阳性检出率的结果表明，受精蛋孵化9~11 d后制备CEF，再培养10 d的细胞上清检出率（10/36）高于直接检测卵白（17/80）与卵白接种CEF（DF1）的细胞上清（7/80）。将经DF1培养后p27抗原阳性样品，用针对ALV-J的单抗JE9做IFA，ALV-J的阳性率为6/7。检测该80枚鸡蛋的卵黄抗体，ALV-J、ALV-AB的抗体阳性率分别为18/80、1/80。结果表明，该皖南黄父母代肉种鸡群存在的外源性ALV感染主要为ALV-J。该研究为ALV的净化提供了可行性检测方法。

猪链球菌2型分泌核酸酶（SsnA）的表达、ELISA方法建立及其在鉴别诊断中的应用

朱剑;康超;张安定;金梅林

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 228-235. doi:

摘要 ( 663 )

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猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌，严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增SsnA基因片段，将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，获得大小为46 ku的融合蛋白，经SDS-PAGE和Western blot分析表明，重组蛋白质具有抗原反应活性。以纯化的融合蛋白作为包被抗原，建立了SsnA-ELISA鉴别诊断方法。对已知背景的人工感染及疫苗免疫血清和临床血清进行检测，比较感染血清和免疫血清的检测结果，结果发现两者差异显著（P<0.05），表明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的检测效果。利用该方法对采集自8个省份的1 446份血清进行检测，显示SS2的阳性率为0%～14.77%，平均阳性率为5.39%。本研究结果表明：猪链球菌2型SsnA可以作为一个良好的鉴别感染的分子诊断标识；对临床血清的检测结果表明感染及流行与气候环境存在明显的关系。

猪源万古霉素耐药肠球菌分离及表型和基因型检测

俞道进;尹兵;易秀丽;马玉芳;李健;黄一帆

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 236-242. doi:

摘要 ( 596 )

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本研究旨在调查3个猪场不同猪群粪便中万古霉素耐药肠球菌（VRE）的分离率并进行耐药表型、基因型的测定，为万古霉素耐药肠球菌的流行病学提供基础数据。根据美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的方法进行耐药表型的测定，采用PCR法鉴定肠球菌并进行耐药基因的扩增，比较表型与基因型的一致性。结果从3个猪场250个粪便样本共分离出30株VRE。不同猪场不同猪群的分离率以哺乳仔猪最高，其次为保育仔猪、怀孕母猪和哺乳母猪，以大猪和公猪的分离率最低。耐万古霉素肠球菌均以土霉素的耐药率最高，为93.3%；以氨苄西林的敏感率最高，为80%。耐药基因检测2株为VanA阳性，12株为VanB阳性，7株为VanC1阳性，5株为VanC2/3阳性，4株未扩增出Van基因。本研究显示3个猪场均能分离到耐万古霉素肠球菌，各猪群耐药菌分离率与猪群接触抗菌药物的程度有一定的相关性，分离的VRE对6种抗生素具有不同程度的耐药，耐药表型与基因型基本一致。

日粮中玉米赤霉烯酮和大豆异黄酮联合作用对后备母猪生殖器官发育和雌激素受体基因转录的影响

王定发;彭运智;张妮娅;齐德生

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 243-250. doi:

摘要 ( 664 )

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本试验旨在研究玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEA）和大豆异黄酮（Soybean isoflavone，ISO）二者联合作用对后备母猪生长性能、生殖器官发育及生殖器官雌激素受体（Estrogen receptors，ERs）基因转录的影响。采用3×3两因子析因法设计，将90头75日龄的D×L×Y三元杂交后备母猪随机分为9个处理，每个处理5个重复，每个重复2头猪。各处理组在基础日粮基础上分别添加ZEA 0、0.5、2 mg·kg^-1和ISO 0、300、600 mg·kg^-1。试验时间为21 d。结果表明：日粮中同时添加ZEA和ISO对后备母猪平均日增体质量（ADG）和平均日采食量（ADFI）影响不显著（P>0.05）。日粮中同时添加ISO和0.5 mg·kg^-1 ZEA与单独添加0.5 mg·kg^-1 ZEA处理组相比，生殖器官质量和阴户宽度增加。但日粮中添加ISO可缓解2 mg·kg^-1 ZEA导致的生殖器官增加质量和阴户红肿（P<0.05），降低子宫和阴道组织ERα mRNA的转录水平，而增加了ERβ mRNA转录水平。结果提示，日粮中添加ZEA和ISO联合作用对后备母猪ADG和ADFI无显著影响，日粮中ISO和低剂量的ZEA联合作用使雌激素作用增强，但可缓解高剂量ZEA的雌激素效应，这种联合作用对生殖器官发育的影响是通过ISO的双相调节作用和改变生殖器官ERs的mRNA转录来调控的。

丙氨酰谷氨酰胺二肽对早期断奶仔猪抗氧化能力及肠道保护的研究

陈恒灿;马黎;陈克嶙;谭丽勤;袁雪波;郭荣富

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 251-259. doi:

摘要 ( 1025 )

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本试验旨在研究丙氨酰谷氨酰胺二肽（Ala-Gln)对早期断奶仔猪抗氧化能力和肠道保护的影响。采用完全随机化设计，选用体质量、胎次、泌乳量、产仔数相近、健康的云南撒坝母猪所产的48头仔猪 (1/2♂，1/2♀)，35日龄断奶，随机分成4个处理,每个处理3个重复，每个重复4头。A组为对照组,饲喂基础日粮,B、C和D组分别饲喂添加0.15%、0.30%和0.45% Ala-Gln的试验日粮。试验期为35～60日龄。结果表明，添加0.15%、0.30%和0.45%Ala-Gln可提高断奶仔猪生长性能，随饲粮Ala-Gln添加水平提高，日采食量、体质量呈二次曲线上升（P<0.05），料重比呈二次曲线降低（P<0.05）。第49日龄的仔猪血清T-AOC和T-SOD含量以二次曲线方式升高（P<0.05），血清MDA活性呈二次曲线降低（P<0.01）。小肠形态学观察结果显示，仔猪十二指肠和回肠绒毛长度以二次曲线方式升高(P<0.01) ，空肠绒毛长度以二次曲线方式升高(P<0.05)，十二指肠和空肠隐窝深度以二次曲线方式降低(P<0.05)，十二指肠、空肠和回肠绒毛长度和隐窝深度比值(V/C)以二次曲线方式提高(P<0.01)。结果提示，引入外源Ala-Gln可以改善撒坝仔猪生长潜力,增强早期断奶仔猪的抗氧化能力，保护肠道结构与功能发育。

去精索上神经（SSN）和精索下神经（ISN）对大鼠睾丸发育和精子发生的影响

霍书英;马爱进;武现军;李玉荣

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 260-266. doi:

摘要 ( 677 )

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本试验旨在研究睾丸神经是否参与调控睾丸的发育和精子的发生过程。大鼠出生后10 d (Postnatal day 10, PD10) 切断睾丸精索上神经（Superior spermatic nerve, SSN）和精索下神经（Inferior spermatic nerve, ISN），然后分别在PD25和PD50时取样分析。结果显示：睾丸去神经不影响PD25时睾丸质量和睾丸大小（P<0.05），但使PD50时的睾丸质量和睾丸尺寸极显著减小，附睾尾精子数极显著降低（P<0.01）。增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen, PCNA）免疫组织化学染色显示睾丸去神经不影响PD25时生殖细胞的增殖，但却影响PD50时生殖细胞的增殖。另外RT-PCR结果显示睾丸去神经明显降低PD25时睾丸3β-羟胆固醇脱氢酶1（3β-hydroxy sterol dehydrogenase 1, 3β-HSD1）mRNA的表达（P< 0.05），并明显抑制PD50时3β-HSD1和雄激素结合蛋白（Androgen binding protein , ABP）mRNA表达（P< 0.01）以及黄体生成素受体（Luteinizing hormone receptor, LHR）和卵泡刺激素受体（Follicle stimulating hormone receptor, FSHR）mRNA表达（P<0.05）。结果表明，支配睾丸的神经SSN和ISN主要影响睾丸下降后以及青春期睾丸曲细精管的发育和精子的发生。

不同生理时期东北梅花鹿血液SOD含量分析

王晓松;唐超;马泽芳;雷玉发;刘永举;蒋小明

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 267-271. doi:

摘要 ( 603 )

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本文旨在研究梅花鹿不同生理时期全血中的SOD含量变化，各生理时期鹿血的抗衰老作用是否存在差异。选用雄性梅花鹿不同生理时期的全血，经离心后用连苯三酚自氧化法测定3个时期溶血液、血细胞内容物、血浆和血细胞细胞膜中SOD含量并计算全血SOD含量。试验结果表明：全血SOD含量以生茸期最高((1 007.07±11.03) U·mL^-1)，且与配种期和生茸前期含量差异极显著(P<0.01)；而配种期和生茸前期含量差异不显著(P>0.05)。结果提示SOD的变化与梅花鹿的生理时期有相关性。生茸期鹿血的SOD含量最高，提高了鹿血的药用价值，特别是抗衰老功效。但各个生理时期鹿血中又以溶血液的SOD含量为最高，因此可以把溶血液作为生产鹿血抗衰老酶产品的原料。

内毒素血症中肝损伤与H2S的关系及阳离子A的保护效应分析

陈超;高洪;严玉霖;陈利平;高利波;赵汝;陈玲

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 272-277. doi:

摘要 ( 622 )

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本研究旨在探讨在内毒素血症中肝脏病理损伤与气体信号分子硫化氢（H2S）的关系及阳离子A（CA）的保护效应。试验将72只SD大鼠随机分为生理盐水（NS）对照组、ET致病组、CA保护组。3组动物经相应处理后分别在第3、4、8、12小时采集血清与肝脏作为检测样本，检测血清中ALT与AST水平变化，采用分光光度法检测肝脏中H2S生成率，采用原位杂交染色与图像分析检测肝脏组织中CSE mRNA的转录水平。结果显示，与对照组比较，ET组血清ALT与AST水平显著升高，CA保护组血清ALT与AST水平则显著低于ET组；ET能够使肝脏组织中H2S生成率显著升高，而CA保护组H2S生成率显著低于ET组；原位杂交图像分析可见ET上调肝脏组织中CSE mRNA的转录水平，而CA能够抑制这种上调效应。研究表明，在内毒素血症的肝脏病理损伤过程中，CSE mRNA的转录水平与H2S的生成率上调，而CA则下调肝脏组织中H2S的水平从而对肝脏损伤发挥了保护作用。

猪TLR4基因在F18大肠杆菌抗性型和敏感型资源群体间的差异表达分析

包文斌;;潘章源;朱璟;叶兰;杜子栋;蔡家嘉;黄小国;朱国强;;吴圣龙;

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 278-283. doi:

摘要 ( 1028 )

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本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平，为探讨该基因在免疫识别和F18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首先，各取8头35日龄F18大肠杆菌抗性型和敏感型苏太仔猪组织样，包括心脏、肝脏、脾脏等11个组织，提取总RNA，以GAPDH基因为内参基因，进行实时荧光定量PCR。对TLR4基因mRNA进行均一化处理，利用荧光阈值(Ct值)计算TLR4基因mRNA在各个组织以及F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间表达量。结果显示，TLR4 mRNA在猪各种组织中广泛表达，在肺、淋巴结、肾脏和脾脏等免疫器官中表达量较高，F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量普遍高于抗性型个体的表达量，在各个组织中（除胃外）TLR4表达量差异倍数从1.083到2.980不等；在肺、淋巴结、肾脏和胸腺组织中，F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量显著高于抗性型个体的表达量(P<0.05)。本研究结果表明，TLR4基因通过天然免疫识别机制对猪F18大肠杆菌病等革兰氏阴性疾病有一定的影响，TLR4基因表达量的下调与F18大肠杆菌的抗性具有一定程度的关系。

藏系绵羊KAP3.2基因多态性及其对部分经济性状的影响

王志有;陈玉林;徐秋良;马忠仁;祁全青

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 284-288. doi:

摘要 ( 697 )

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采用PCR-SSCP和DNA测序技术，对高原型、欧拉型和乔科型3个类型共254只藏绵羊KAP3-2基因的部分序列进行多态性分析，并利用最小二乘线性模型研究了其多态性与体质量、毛长和产毛量性状的关联性。结果，3个群体藏绵羊在KAP3-2基因座上均检测到AA、AB和BB 3种基因型，高原型以A等位基因为主，欧拉型和乔科型以B等位基因为主。3个群体基因型频率均处于Hardy-Weinberg非平衡状态，高原型和欧拉型达中度多态，乔科型为低度多态。测序表明KAP32基因271 bp处存在1个C→T的突变, 属同义突变。体质量性状上，3类藏绵羊各基因型间均差异不显著；毛长性状上，3类藏绵羊AA基因型均显著高于BB型（P<0.05或P<0.01)，而与AB型间无显著差异；产毛量性状上，3类藏绵羊AA基因型均显著高于BB和AB型 (P<0.05)。结果表明，KAP3.2基因可作为影响藏系绵羊毛长和产毛量性状的分子标记。

日粮磷水平对肉鸡磷代谢及Na/Pi-Ⅱb基因mRNA表达的影响

方热军;贺佳;曹满湖;陈娟;李美君;方成堃

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 289-296. doi:

摘要 ( 633 )

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本论文旨在探讨不同磷水平对肉鸡磷代谢及小肠Na/Pi-Ⅱb（钠依赖Ⅱb型磷转运载体蛋白）基因mRNA表达的影响。选择60日龄体质量约1.5 kg的三黄肉鸡40只，随机分配至日粮总磷水平分别为0.4%（A组）、0.6%（B组）、0.8%（C组）和1.0%（D组）（钙∶有效磷= 2∶1）的4个处理中，每个处理设5个重复，每个重复2只鸡（1个代谢笼），其中B处理为对照组。试验结果表明，血清磷随日粮磷水平提高而升高，血清钙随日粮磷水平提高而下降；日粮总磷水平在0.8%时，血清AKP活性最低，而钙磷代谢率最高；与对照组相比，较低磷（TP 0.4%）提高肉鸡空肠前段（P<0.01）和空肠后段(P>0.05)Na/Pi-Ⅱb mRNA表达水平，而高磷（TP 0.8%，TP 1.0%）则降低肉鸡十二指肠（P<0.01）、空肠段(P>0.05)Na/Pi-Ⅱb mRNA表达水平；十二指肠和空肠前段对磷的吸收率随饲粮磷水平的提高而下降，各肠段对磷的体外吸收率在较低磷（TP 0.4%）时最高。结果提示，低磷日粮条件下，提高日粮磷水平可上调Na/Pi-Ⅱ b mRNA表达量，促进磷的吸收，日粮磷水平过高时，则抑制Na/Pi-Ⅱ b mRNA表达。

63株H9N2亚型禽流感病毒NA基因序列分析

王守春;尹燕博;王晓红;李海英;王建琳;张毅;郭妍妍

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 297-305. doi:

摘要 ( 1085 )

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为了从分子水平上掌握我国H9N2亚型禽流感病毒NA基因变异情况和流行规律，作者汇集了我国部分省市的63株H9N2亚型禽流感毒株，采用RT-PCR技术对其NA基因进行扩增、克隆和测序，并对所得序列进行同源性和进化分析。结果显示分离株核苷酸同源性在87.4%~99.5%；52株NA蛋白颈部63—65位点缺失了T、E、I 3个氨基酸，属于Y280-like分支，11株没有发生缺失，属于G9-like分支，没有发现G1-like分支和Y439-like分支的NA基因毒株；唾液酸结合位点（HB）和抗原决定簇的氨基酸发生了明显的变异；酶活性位点处的氨基酸非常保守，没有发生与抗神经氨酸酶抑制剂奥塞米韦和扎那米韦相关的氨基酸突变；36/63毒株失去了402位点处的潜在N-糖基化位点；而28/63毒株新出现了264位点处的潜在N-糖基化位点。本研究提示目前中国大陆地区商业鸡群流行的H9N2亚型禽流感病毒NA基因分为2个差异较大分支——Ｙ280-like分支和G9-like分支，而Y280-like分支仍是我国H9N2亚型禽流感病毒流行的主要类型。

牛支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆三重PCR检测方法的建立及初步应用

李大伟;黄灿平;张彦明;谢建华;冉智光;熊仲良;范伟兴

畜牧兽医学报, 2011, 42(2): 306-310. doi:

摘要 ( 620 )

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本研究旨在建立一种可一次性区分牛支原体、丝状支原体丝状亚种小克隆和无乳支原体的三重PCR诊断方法，为临床诊断和流行病学调查提供可靠检测技术。根据GenBank发表的上述3种病原的基因组序列保守区域设计3对特异性引物建立三重PCR方法；确定其检测敏感性，以猪支原体、鸡支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆基因作模板检验其特异性；同时和病原分离鉴定结果对比其准确性。结果表明在优化体系和条件下能够同时得到扩增长度为448、549、375 bp 3条特异性片段，未扩增出猪、鸡支原体模板特异性片段；其敏感性（可检测到的最小模板DNA含量）为0.8 ng·μL^-1；36份临床样品检测结果显示，三重PCR检测结果与分离培养鉴定方法一致，均能鉴定出牛支原体阳性病料。本研究建立的三重PCR诊断方法能够一次性鉴别3种支原体，具有高敏感性、特异性和准确性，可用于临床诊断和流行病学调查。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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