鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析

畜牧兽医学报 ›› 2008, Vol. 39 ›› Issue (11): 1575-1580.

鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析

刘红霞^1，2，贾万忠¹，郭爱疆¹，张少华¹，闫鸿斌¹，岳城²，才学鹏¹*

1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046；2. 新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-11-24 发布日期:2008-11-24
通讯作者: 才学鹏

Recombinant Expression of Microneme Protein 5 Gene of Eimeria necatrix LZ Strain in E. coli and Antigenicity of Recombinant Protein

LIU Hong-xia^1,2, JIA Wan-zhong¹,GUO Ai-jiang¹,ZHANG Shao-hua¹,
YAN Hong-bin¹,YUE Cheng², CAI Xue-peng¹*

1. Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province, State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046,China；2. College of Veterinary Medicine， Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-11-24 Published:2008-11-24

摘要/Abstract

摘要： 根据已发表的鸡柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）微线蛋白5（Microneme protein 5，MIC-5）基因的核苷酸序列设计引物，以毒害艾美耳球虫(E. necatrix)DNA为模板，利用PCR方法扩增出EnMIC-5部分基因片段。将基因片段与pMD18-T simple载体连接，重组质粒测序结果表明EnMIC-5基因大小为1 470 bp，编码490个氨基酸。EnMIC-5与pET-28a(+)载体构建重组表达质粒pET-EnMIC-5，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测，表达产物为相对分子质量约57.5 ku的融合蛋白。Western-blot分析结果表明表达蛋白可被鸡感染E. necatrix阳性血清识别。用重组蛋白免疫昆明鼠，一免后15 d即可检测到相应抗体，且抗体在三免后40 d仍维持较高水平，证实重组蛋白具有良好的免疫原性，可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。

关键词: 毒害艾美耳球虫, 微线蛋白5, 基因克隆, 重组表达, 免疫原性

Abstract: Based on the published nucleotide sequence of MIC5 gene of Eimeria tenella, a pair of primers was designed. The EnMIC5 gene was amplified by PCR from the genomic DNA of E. necatrix. The amplicons were cloned into pMD18-T simple. Sequence analysis showed that the PCR fragment of EnMIC-5 gene is 1 470 base pairs in length and encodes a partial protein of 490 amino acids. Then the gene was introduced into pET-28a(+) vector, and the recombinant plasmid pET-EnMIC-5 was expressed in the E. coli BL21. The results of SDSPAGE revealed that the fusion protein with molecular weight about 57-5 ku was over-expressed after induction of IPTG. Western-blot results demonstrated that the expressed recombinant protein was reacted with sera of chickens against E. necatrix infection. A high titer of antibody was detected at two weeks after the injection of the recombinant protein in Kunming mice suggesting that it should have good immunogenicity, and make mice produce high level of specific antibody.

Key words: Eimeria necatrix, microneme protein 5, gene cloning, recombinant expression, immunogenicity

刘红霞;贾万忠;郭爱疆;张少华;闫鸿斌;岳城;才学鹏. 鸡毒害艾美耳球虫LZ株MIC5基因的重组表达及其表达产物的抗原性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2008, 39(11): 1575-1580.

LIU Hong-xia;JIA Wan-zhong;GUO Ai-jiang;ZHANG Shao-hua;YAN Hong-bin;YUE Cheng;CAI Xue-peng. Recombinant Expression of Microneme Protein 5 Gene of Eimeria necatrix LZ Strain in E. coli and Antigenicity of Recombinant Protein[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2008, 39(11): 1575-1580.

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