共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察

畜牧兽医学报 ›› 2006, Vol. 37 ›› Issue (4): 401-407.

共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察

赵武;肖少波;方六荣;江云波;宋云峰;严琳;余晓岚;陈焕春

1. 华中农业大学动物医学院动物病毒室，武汉 430070；2. 广西兽医研究所，南宁 530001

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-04-25 发布日期:2006-04-25

Construction of Recombinant Pseudorabies Virus Coexpressing E and M Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Fused with VP22 Protein of Bovine Herpesvirus 1 and Its Immunogenicity in Mice

ZHAO Wu;XIAO Shao-bo;FANG Liu-rong;JIANG Yun-bo;SONG Yun-feng;YAN Lin;YU Xiao-lan;CHEN Huan-chun

1.Laboratory of Animal Virology, College of Veterinary Medicine，Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070, China; 2. Guangxi Veterinary Research Institute，Nanning 530001，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-04-25 Published:2006-04-25

摘要/Abstract

摘要： 为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因工程疫苗，以伪狂犬病毒（PRV）gE基因缺失标志疫苗株TK^-/gE^-/LacZ⁺为病毒载体，通过同源重组，构建了共表达与牛疱疹病毒1型VP22（BHV-1 VP22）融合的PRRSV E及M蛋白的重组伪狂犬病毒（rPRV）TK^-/gE^-/VP22E⁺/VP22M⁺。经PCR、Southern blot、Western blot证实rPRV构建正确,并能表达与BHV-1 VP22融合的PRRSV E及M蛋白。rPRV在IBRS-2、PK-15细胞中的增殖滴度与PRV亲本株相比无显著差异，表明外源基因的插入不影响rPRV增殖。用该rPRV免疫BALB/c小鼠，检测免疫小鼠抗PRRSV中和抗体及脾淋巴细胞增殖反应，并与未融合VP22的单表达PRRSV E蛋白及共表达E及M蛋白的rPRV TK^-/gE^-/E⁺与TK^-/gE^-/E⁺/M⁺进行比较。结果显示TK^-/gE^-/VP22E⁺/VP22M⁺可诱导小鼠产生更好的体液与细胞免疫反应，BHV-1 VP22发挥了佐剂效应。本研究为研制安全、有效的猪繁殖与呼吸综合征-伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了基础。

关键词: 牛疱疹病毒1型VP22, 猪繁殖与呼吸综合征病毒, 修饰型ORF5基因, ORF6基因, 重组伪狂犬病毒

Abstract: In the present study, the ORF5M gene (the modified ORF5 gene) and ORF6 gene，the two major immunogenicity genes of PRRSV, were used as the target genes, and bovine herpesvirus 1(BHV-1 )VP22 possessing protein transduction property was chosed as the immunoadjuvant. Based on homologous recombination，a recombinant PRV (rPRV) TK^-/gE^-/VP22E⁺/VP22M⁺ coexpressing PRRSV E and M protein fused with BHV-1 VP22 protein was constructed by using PRV TK^-/gE^-/LacZ⁺ as parent strain. The rPRV was confirmed by PCR, Southern blot and Western blot. The results of TCID₅₀ tests showed that the insertion of the foreign genes had no influence on the propagation of rPRV in IBRS-2 or PK-15 cells. BALB/c mice were immunized with rPRV TK^-/gE^-/VP22E⁺/VP22M⁺, and compared with rPRV TK^-/gE^-/E⁺ expressing ORF5M gene and TK^-/gE^-/E⁺/M⁺ coexpressing ORF5M and ORF6 genes respectively. Neutralizing antibodies and lymphocyte proliferative responses were evaluated at 10 weeks after primary immunization. Among three rPRVs，TK^-/gE^-/VP22E⁺/VP22M⁺ had the best effect on enhancing PRRSV-specific humoral and cellular immune responses, and VP22 showed adjuvant efficiencies on rPRV vaccine to a certain degree. In conclusion, the study established a base for the research of bivalent genetic engineering vaccines against PRRSV and PRV.

Key words: bovine herpesvirus 1 VP22, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, modified ORF5 gene, ORF6 gene, recombinant pseudorabies virus

赵武;肖少波;方六荣;江云波;宋云峰;严琳;余晓岚;陈焕春 . 共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察[J]. 畜牧兽医学报, 2006, 37(4): 401-407.

ZHAO Wu;XIAO Shao-bo;FANG Liu-rong;JIANG Yun-bo;SONG Yun-feng;YAN Lin;YU Xiao-lan;CHEN Huan-chun. Construction of Recombinant Pseudorabies Virus Coexpressing E and M Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Fused with VP22 Protein of Bovine Herpesvirus 1 and Its Immunogenicity in Mice[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2006, 37(4): 401-407.

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