黑曲霉发酵白术对小鼠胸腺指数、脾指数及脾T淋巴细胞增殖的影响

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.026

摘要/Abstract

摘要：

旨在研究黑曲霉发酵白术对小鼠免疫功能的影响。利用环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型，检测黑曲霉发酵白术对小鼠胸腺指数、脾指数和脾T淋巴细胞增殖的影响。通过高效液相色谱技术（HPLC）检测白术发酵前后的有效成分变化。并通过正交试验筛选了提高白术有效成分含量的最佳发酵条件。试验结果表明：（1）黑曲霉发酵后的白术能有效提高小鼠免疫功能，其中发酵白术低、中、高剂量（0.5、1、2 g•kg^-1）均能显著提高胸腺指数（P<0.05）；而中剂量发酵白术能显著提高脾指数及小鼠脾T淋巴细胞增殖（P<0.05）；（2）HPLC检测黑曲霉菌发酵白术后白术内酯Ⅰ的含量升高；（3）确立提高有效成分白术内酯Ⅰ含量的最佳发酵条件为接菌量8%，含水量40%，发酵时间96 h，此条件下白术内酯Ⅰ含量是原来的1.4倍。试验进一步揭示黑曲霉发酵白术可通过发酵后白术内酯Ⅰ含量的升高来增强小鼠免疫功能。

关键词: 黑曲霉, 发酵白术, 免疫功能, 白术内酯I

Abstract:

This study aimed to study the effect of Aspergillus niger-fermented Atractylodes macrocephala Koidz on the immune function of mice.An immunosuppression mice model (cyclophosphamide) was utilize to study the effect of fermented Atractylodes macrocephala Koidz on spleen index，thymus index and T lymphocyte proliferation.High performance liquid chromatography (HPLC) was used to analyze the changes in the active omponents of Atractylodes macrocephala Koidz with or without fermentation by Aspergillus niger.Orthogonal experiment was conducted to select the best conditions.The results showed that：1)The low，middle and high dose groups (0.5，1，2 g•kg^-1) of fermented Atractylodes macrocephala Koidz can effectively increase thymus index (P<0.05).In addition，middle dosage group of fermented Atractylodes macrocephala Koidz can effectively increase spleen index and T lymphocyte proliferation (P<0.05)；2) The results of HPLC showed that the content of atractylenolide Ⅰ was effectively increased in the Atractylodes macrocephala Koidz processed by Aspergillus niger compared with unfermented Atractylodes macrocephala Koidz；3) The best fermentation conditions were as follows：inoculum concentration was 8%；water content was 40%；fermentation time was 96 h，under the optimized conditions，the content of atractylenolide Ⅰ was 1.4 times of those in raw Atractylodes macrocephala Koidz.These results indicated that fermented Atractylodes macrocephala Koidz could improve immune function of mice by increasing the content of atractylenolide Ⅰ.

Key words: Aspergillus niger, fermented Atractylodes macrocephala Koidz, immune function, atractylenolide Ⅰ

中图分类号:

S853.73

孙向婉，王芸，王鑫，刘晓晔，穆祥，董虹. 黑曲霉发酵白术对小鼠胸腺指数、脾指数及脾T淋巴细胞增殖的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(7): 1502-1510.

SUN Xiang-wan，WANG Yun，WANG Xin，LIU Xiao-ye，MU Xiang，DONG Hong. Effect of Aspergillus niger-Fermented Atractylodes macrocephala Koidz on the Spleen Index，Thymus Index and T Lymphocyte Proliferation of Mice[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(7): 1502-1510.

参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：95.
Chinese Pharmacopoeia Commission.Chinese Pharmacopoeia 2010(the first part)［M］.Beijing：China Medical Science Press，2010：95.(in Chinese)
［2］黄海英.白术活性成分的提取、纯化及功能性研究［D］.南昌：南昌大学，2006.
HUANG H Y.Studies on extraction、purification and function of the active components in Atractylodes macrocephala Koidz［D］.Nanchang：Nanchang University，2006.(in Chinese)
［3］彭腾，李鸿翔，邓赟，等.白术内酯类成分及其药理作用研究进展［J］.中国药房，2012，23(39)：3732-3734.
PENG T，LI H X，DENG Y，et al.Atractylenolide and pharmacological effects studies of Atractylodes Macrocephala Koidz［J］.China Pharmacy，2012，23(39)：3732-3734.(in Chinese)
［4］李伟，文红梅，崔小兵，等.白术健脾有效成分研究［J］.南京中医药大学学报(自然科学版)，2006，22(6)：366-367.
LI W，WEN H M，CUI X B，et al.Invigorating spleen active ingredient research on Atractylodes macrocephala Koidz［J］.Journal of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine(Natural Science)，2006，22(6)：366-367.(in Chinese)
［5］WANG C，DUAN H，HE L.Inhibitory effect of atractylenolide I on angiogenesis in chronic inflammation in vivo and in vitro［J］.Eur J Pharmacol，2009，612(1-3)：143-152.
［6］SHAN G S，ZHANG L X，ZHAO Q M，et al.Metabolomic study of raw and processed Atractylodes macrocephala Koidz by LC-MS［J］. J Pharm Biomed Anal，2014，98：74-84.
［7］潘利文，宋捷.白术内酯Ⅰ体内外的抗黑色素瘤研究［J］.中国医院药学杂志，2015，35(8)：682-685.
PAN L W，SONG J.Study on inhibiting effects of atractylenolide Ⅰ against melanoma in virto and in vivo［J］.Chinese Journal of Hospital Pharmacy，2015，35(8)：682-685.(in Chinese)
［8］PINTO G A S，LEITE S G F，TERZI S C，et al.Selection of tannase-producing Aspergillus niger strains［J］. Braz J Microbiol，2001，32(1)：24-26.
［9］ZHANG X H，CAO F L，SUN Z Y，et al.Effect of feeding Aspergillus niger-fermented Ginkgo biloba-leaves on growth，small intestinal structure and function of broiler chicks［J］.Livest Sci，2012，147(1-3)：170-180.
［10］王延年，董雪，乔延江，等.中药发酵研究进展［J］.世界科学技术（中医药现代化），2010，12(3)：437-441.
WANG Y N，DONG X，QIAO Y J，et al.Fermentation of traditional Chinese medicine［J］.World Science and Technology(Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica)，2010，12(3)：437-441.(in Chinese)
［11］MIYAKE Y，FUKUMOTO S，OKADA M，et al.Antioxidative catechol lignans converted from sesamin and sesaminol triglucoside by culturing with Aspergillus［J］.J Agric Food Chem， 2005，53(1)：22-27.
［12］刘观忠，安胜英，王凤霞．发酵中药对肉仔鸡生产性能和血液生化指标的影响［J］.饲料工业，2011，32(23)：47-49.
LIU G Z，AN S Y，WANG F X.Effects of fermented Traditional Chinese Medicines on perfeormance and blood biochemical indices of broilers［J］.Feed Industry，2011，32(23)：47-49.(in Chinese)
［13］秦俊杰．发酵型黄芪党参饲料添加剂的评价研究［D］.北京：中国农业科学院，2011.
QIN J J.Study on the evaluation of the fermented feed additive of Astragalus membranaceus and Codonopsis pilosula［D］.Beijing：Chinese Academy of Agricultural Sciences，2011.(in Chinese)
［14］张凯，杨志强，王学智，等.发酵型黄芪提取物对肉仔鸡生产性能及免疫球蛋白的作用研究［J］.湖北农业科学，2011，50(6)：1216-1218.
ZHANG K，YANG Z Q，WANG X Z，et al.Study on effects of fermented radix Astragalus extraction on growth，immunoglobulin of broiler chicken［J］.Hubei Agricultural Sciences，2011，50(6)：1216-1218.(in Chinese)
［15］范秀蓉，李广武，沈萍.微生物学试验［M］.北京：高等教育出版社，1999.
FAN X R，LI G W，SHEN P.Laboratory experiments in microbiology［M］.Bejing：Higher Education Press，1999.(in Chinese)
［16］杨宪勇.应用环磷酰胺构建C57BL/6J小鼠免疫抑制模型［J］.中国组织工程研究，2012，16(40)：7486-7490.
YANG X Y.Establishing a C57BL/6J mouse immunosuppressive model induced by cyclophosphamide［J］. Chinese Journal of Tissue Engineering Research，2012，16(40)：7486-7490.(in Chinese)
［17］陈文，何鸽飞，姜曼花，等.近10年白术的研究进展［J］.时珍国医国药，2007，18(2)：338-340.
CHEN W，HE G F，JIANG M H，et al.Progress on Atractylodes macrocephala Koidz in recent five years［J］.Shizhen Medicine and Materia Medica Research，2007，18(2)：338-340.(in Chinese)
［18］黄利，李利民，唐丽燕.白术水煎剂对小鼠免疫功能的影响［J］.中药药理与临床，2012，28(1)：114-115.
HUANG L，LI L M，TANG L Y.Effect of Atractylodes macrocephala Koidz Decoction on the immune function of mice［J］.Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica，2012，28(1)：114-115.(in Chinese)
［19］LEE J C，LEE K Y，SON Y O，et al.Stimulating effects on mouse splenocytes of glycoproteins from the herbal medicine Atractylodes macrocephala Koidz［J］.Phytomedicine，2007，14(6)：390-395.
［20］孙文平，李发胜，陈晨，等.白术多糖对小鼠免疫功能调节的研究［J］．中国微生态学杂志，2011，23(10)：881-882，886.
SUN W P，LI F S，CHEN C，et al.Immunomodulation of Atractylodis polysaccharides in mice［J］.Chinese Journal of Microecology，2011，23(10)：881-882，886.(in Chinese)
［21］黄争荣，王泳，王榕平，等.参苓白术散对荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ、TNF-α 的影响［J］．光明中医，2010，25(9)：1584-1586.
HUANG Z R，WANG Y，WANG R P，et al.Effect of Shenlinbaizhu Powder on the level of IL-2、IFN-γ、TNF-α in Tumor-bearing Mice［J］.Guangming Journal of Chinese Medicine，2010，25(9)：1584-1586.(in Chinese)
［22］赵迎虎，张明军，刘进辉，等.中药制剂对小鼠耐力及免疫器官指数影响［J］.中兽医医药杂志，2010(1)：14-17.
ZHAO Y H，ZHANG M J，LIU J H，et al.Effects of traditional Chinese medicine preparation on the endurance and immune organ index in mice［J］.Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine，2010(1)：14-17.(in Chinese)
［23］徐占云，秦睿玲，褚耀诚，等.枸杞多糖对雏鸡淋巴细胞体外增殖及分泌IL-2的影响［J］.畜牧兽医学报，2013，44(2)：322-328.
XU Z Y，QIN R L，CHU Y C，et al.Effects of Lycium barbarum polysaccharide on cell proliferation of chicken lymphocytes and IL-2 excretion in vitro［J］．Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2013，44(2)：322-328.(in Chinese)
［24］郭芳，刘秀书，孟祥琴，等.六味地黄发酵液的免疫调节作用［J］.河北医科大学学报，2001，22(2)：72-74.
GUO F，LIU X S，MENG X Q，et al.Immunomodulating activity of fermented decotion of Liuweidihuang［J］.Journal of Hebei Medical Univerisity，2001，22(2)：72-74.(in Chinese)
［25］徐启华，赵堃，曹军.玉屏风散发酵液对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用［J］.齐齐哈尔医学院学报，2006，27(6)：643-646.
XU Q H，ZHAO K，CAO J.The regulating effect of yupingfeng-ferment-product on the immune function of immunosuppressive mice［J］. Journal of Qiqihar Medical College，2006，27(6)：643-646.(in Chinese)
［26］刘金海.黑曲霉菌在生物发酵饲料上的应用及其产品对动物抗病力的影响［D］.长春，吉林大学，2012.
LIU J H.Applications of Aspergillus Niger media in biological fermentation feed and effects of its production on animal disease-resistant ability［D］.Changchun：Jilin University，2012.(in Chinese)
［27］陶蕾，王宏伟，许冠英，等.黑曲霉发酵对黄柏中游离态小蘖碱含量的影响［J］.中兽医医药杂志，2011 (2)：41-43.
TAO L，WANG H W，XU G Y，et al.Effect of Aspergillus niger fermentation on the contents of free berberine in Cortex phellodendri［J］.Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine，2011(2)：41-43.(in Chinese)
［28］韩春杨，刘翠艳，牛钟相．中药制剂发酵前后成分的变化及对肉鸡部分免疫指标和生长的影响［J］．畜牧兽医学报，2005，36(11)：1223-1227.
HAN C Y，LIU C Y，NIU Z X.Component changes of Chinese herb before and after fermentation and the effect on some immune indices and growth performance of broiler chickens［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2005，36(11)：1223-1227.(in Chinese)
［29］安胜英，马学会，刘观忠.发酵中药添加剂对肉仔鸡免疫机能和抗氧化机能的影响［J］.畜牧兽医学报，2015，46(5)：863-867.
AN S Y，MA X H，LIU G Z.Effects of fermented Chinese herbs on immunty and antioxidants ability of broilers［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2015，46(5)：863-867.(in Chinese)
［30］郝延军，桑育黎，李宝林，等.白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响［J］.时珍国医国药，2006，17(9)：1617-1618.
HAO Y J，SANG Y L，LI B L，et al.Effect of atractylode I、III on saliva amylase activity in rats of diarrhea and spleen deficiency［J］.Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，2006，17(9)：1617-1618.(in Chinese)
［31］熊蕴珠.白术内酯Ⅰ对MyD88+人卵巢癌细胞分泌的免疫抑制因子TGF-β1、IL-17A、IL-10和IL-4的影响［D］.成都：成都中医药大学，2014.
XIONG Y Z.The effect of atractylenolide I on immune inhibitory cytokines：TGF-B1、IL-17A、IL-10 and IL-4 secretion of MyD88+ human ovarian cancer cells［D］.Chengdu：Chengdu University of TCM，2014.(in Chinese)
［32］王葱葱.白术内酯I对MyD88+人卵巢癌细胞的吲哚胺-2，3双加氧酶(indoleamine-2，3-dioxygenase IDO)的表达及外周血T淋巴细胞增殖活性的影响［D］.成都：成都中医药大学，2014.
WANG C C.Atractylenolide I acting on MyD88+ human ovarian cancer cells have an effect on expression of indoleamine 2，3-dioxygenase（IDO）and T lymphocyte proliferation activity in peripheral blood［D］.Chengdu：Chengdu University of TCM，2014.(in Chinese)
［33］刘双，杨静，江振作，等.中药“神曲”发酵工艺及质量标准研究进展［J］.天津中医药，2015，32(5)：318-320.
LIU S，YANG J，JIANG Z Z，et al.Research progress of fermentation technology and quality standard of Shenqu［J］.Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine，2015，32(5)：318-320.(in Chinese)
［34］陈富文，史高峰，王国英，等.响应面法优化复方中药发酵工艺［J］.中国中医药信息杂志，2014，21(4)：73-77.
CHEN F W，SHI G F，WANG G Y，et al.Optimization of fermentation process of compound Chinese Medicine by response surface methodology［J］.Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine，2014，21(4)：73-77.(in Chinese)

[1]	彭孝坤, 张宇, 黄晓瑜, 周广琛, 邢晓南, 张恩平. 急性冷应激对绵羊免疫功能和不同组织热休克蛋白70家族基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1625-1634.
[2]	彭孝坤, 张宇, 黄晓瑜, 周广琛, 邢晓南, 张恩平. 急性冷应激对绵羊免疫功能和不同组织热休克蛋白70家族基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1625-1634.
[3]	彭孝坤, 赵天, 黄晓瑜, 张宇, 邢晓南, 张恩平. 急性热应激对山羊血液生化指标及血淋巴细胞热休克蛋白70家族基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1219-1229.
[4]	彭孝坤, 赵天, 黄晓瑜, 张宇, 邢晓南, 张恩平. 急性热应激对山羊血液生化指标及血淋巴细胞热休克蛋白70家族基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1219-1229.
[5]	耿正颖, 史林鑫, 刘萍, 陆文清. 日粮中添加丁酸梭菌对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力和免疫功能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(8): 1651-1660.
[6]	耿正颖, 史林鑫, 刘萍, 陆文清. 日粮中添加丁酸梭菌对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力和免疫功能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(8): 1651-1660.
[7]	靳二辉, 陈耀星, 周金星, 李升和, 任曼, 胡倩倩, 金光明. 黄芪、枸杞、金银花等中草药复方制剂对肉鸡免疫器官发育及免疫功能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(6): 1128-1139.
[8]	刁华杰, 冯京海, 王雪洁, 刁新平. 日循环高温对蛋鸡抗氧化能力及免疫机能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(6): 1044-1053.
[9]	刁华杰, 冯京海, 王雪洁, 刁新平. 日循环高温对蛋鸡抗氧化能力及免疫机能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(6): 1044-1053.
[10]	靳二辉, 陈耀星, 周金星, 李升和, 任曼, 胡倩倩, 金光明. 黄芪、枸杞、金银花等中草药复方制剂对肉鸡免疫器官发育及免疫功能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(6): 1128-1139.
[11]	孙永波, 栾素军, 王亚, 萨仁娜, 张宏福. 舍内不同湿度对肉鸡体热调节和血液指标的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(4): 669-677.
[12]	孙永波, 栾素军, 王亚, 萨仁娜, 张宏福. 舍内不同湿度对肉鸡体热调节和血液指标的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2017, 48(4): 669-677.
[13]	孙向婉，王芸，王鑫，刘晓晔，穆祥，董虹. 黑曲霉发酵白术对小鼠胸腺指数、脾指数及脾T淋巴细胞增殖的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(7): 1502-1510.
[14]	王蜀金，王斌星，郭春华，柏雪，彭忠利，张正帆，周琳. 分泌表达pEGF的重组酿酒酵母在断奶仔猪上的应用研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(5): 944-954.
[15]	王蜀金，王斌星，郭春华，柏雪，彭忠利，张正帆，周琳. 分泌表达pEGF的重组酿酒酵母在断奶仔猪上的应用研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(5): 944-954.