山羊卵巢维持基因FOXL2启动子活性及调控区域分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.12.005

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (12): 2153-2160.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.12.005

山羊卵巢维持基因FOXL2启动子活性及调控区域分析

耿立英^1，2，张宇^1，2，李祥龙^1，2*，周荣艳²，李兰会²，王志刚²

（1.河北科技师范学院，秦皇岛 066600； 2.河北农业大学动物科技学院，保定 071000）

收稿日期:2015-01-06 出版日期:2015-12-23 发布日期:2015-12-18
通讯作者: 李祥龙，教授，博士，博士生导师，主要从事动物遗传育种研究，E-mail：lixianglongcn@yahoo.com
作者简介:耿立英（1974-），女，山东平原人，副教授，博士生，主要从事动物遗传育种研究，E-mail：rosegengly@126.com
基金资助:
河北省高校创新团队领军人才培育计划（LJRC004）

Activity and Regulation Region Analysis of Promoter of Goat FOXL2 Gene

GENG Li-ying^1，2，ZHANG Yu^1，2，LI Xiang-long^1，2* ，ZHOU Rong-yan²，LI Lan-hui²，WANG Zhi-gang²

(1.Hebei Normal University of Science & Technology，Qinhuangdao 066600，China；2.College of Animal Science and Technology，Agricultural University of Hebei，Baoding 071000，China)

Received:2015-01-06 Online:2015-12-23 Published:2015-12-18

摘要/Abstract

摘要：

旨在研究山羊卵巢维持基因FOXL2启动子活性以及探究该基因的调控机理。从NCBI数据库调取FOXL2基因启动子序列，用生物信息学软件对其核心启动子和转录因子进行预测分析。使用 PCR技术克隆FOXL2基因启动子序列，并构建一系列缺失载体，瞬时转染293T和A375细胞，利用双荧光素酶基因检测仪测定相对荧光素酶活性值。结果表明，该基因启动子区域存在两个典型的CpG岛，分别位于（-920/+51（972 bp））和（+125/+555（430 bp））区域；经Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定表明，重组载体质粒构建正确；在细胞中插入不同长度的FOXL2基因启动子片段，随着启动子5′端截短，荧光素酶转录活性先升高再逐渐降低。（-934/+324）区域存在转录活性，（-32/+324）区段包含了转录的基本元件；（-934/-456）区域在转录过程中对FOXL2基因起负调控作用，（-456/-192）区域为正调控区域。

关键词: 山羊, FOXL2基因, 启动子, 活性

Abstract:

The research was designed to study the activity of goat ovarian maintenance gene FOXL2 promoter and explore the gene’s regulation mechanism.FOXL2 promoter sequence was retrieved from the NCBI database，bioinformatics software was adopted to predict its core promoter and transcription factors.PCR technology was used to clone FOXL2 gene promoter sequence and construct a series of deletion vectors，293T and A375 cells were transiently transfected，dual luciferase gene detector was used to measure the relative luciferase activity value.The results indicated that there were 2 typical CpG islands in the gene promoter region，which were located at （-920/+51(972 bp)） and （+125/+555(430 bp)） regions；the result of Kpn I and Hind Ⅲ dual enzyme digestion test suggested that the recombinant plasmid was constructed correctly；FOXL2 gene promoter fragments with different lengths were inserted into the cells.When the promoter 5′was truncated，luciferase transcriptional activity firstly increased and then decreased.The result indicate that （-934/+324） region has transcriptional activity，（-32/+324） region contain the basic elements of transcription；（-934/-456） region negatively regulates FOXL2 gene during the transcription process，（-456/-192） region is a positive regulatory region.

Key words: goat, FOXL2 gene, promoter, activity

中图分类号:

S827
S813.3

耿立英，张宇，李祥龙，周荣艳，李兰会，王志刚. 山羊卵巢维持基因FOXL2启动子活性及调控区域分析[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(12): 2153-2160.

GENG Li-ying，ZHANG Yu，LI Xiang-long，ZHOU Rong-yan，LI Lan-hui，WANG Zhi-gang. Activity and Regulation Region Analysis of Promoter of Goat FOXL2 Gene[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(12): 2153-2160.

参考文献

［1］BEYSEN D，RAES J，LEROY B P，et al.Deletions involving long-range conserved nongenic sequences upstream and downstream of FOXL2 as a novel disease-causing mechanism in blepharophimosis syndrome［J］.Am J Hum Genet，2005，77(2)：205-218.
［2］朱建莹，李艳艳，孙岩，等.突变前后 FOXL2 基因的生物信息学分析研究［J］.中华临床医师杂志（电子版），2013，7(8)：3351-3356.
ZHU J Y，LI Y Y，SUN Y，et al.The bioinformatics study of normal and mutational human FOXL2 gene［J］.Chinese Journal of Clinicians（Electronic Edition），2013，7(8)：3351-3356.(in Chinese)
［3］LI M H，YANG H H，LI M R，et al.Antagonistic roles of Dmrt1 and Foxl2 in sex differentiation via estrogen production in tilapia as demonstrated by TALENs［J］.Endocrinology，2013，154(12)：4814-4825.
［4］GENNOTTE V，MÉLARD C，D′COTTA H，et al.The sensitive period for male-to-female sex reversal begins at the embryonic stage in the Nile tilapia and is associated with the sexual genotype［J］.Mol Reprod Dev，2014，81(12)：1146-1158.
［5］BAHAMONDE P A，MCMASTER M E，SERVOS M R，et al.Molecular pathways associated with the intersex condition in rainbow darter(Etheostoma caeruleum) following exposures to municipal wastewater in the Grand River basin，ON，Canada.Part B［J］.Aquat Toxicol，2015，159：302-316.
［6］PISARSKA M D，BARLOW G，KUO F T.Minireview：roles of the forkhead transcription factor FOXL2 in granulosa cell biology and pathology［J］.Endocrinology，2011，152(4)：1199-1208.
［7］BOULANGER L，PANNETIER M，GALL L，et al.FOXL2 is a female sex-determining gene in the goat［J］.Curr Biol，2014，24(4)：404-408.
［8］GEORGES A，L′HÔTE D，TODESCHINI A L，et al.The transcription factor FOXL2 mobilizes estrogen signaling to maintain the identity of ovarian granulosa cells［J］.Elife，2014，3：e04207.doi：10.7554/eLife.04207.
［9］GEORGES A，AUGUSTE A，BESSIÉRE L，et al.FOXL2：a central transcription factor of the ovary［J］.J Mol Endocrinol，2014，52(1)：R17-R33.
［10］LI G L，ZHANG M Z，DENG S P，et al.Effects of temperature and fish oil supplementation on ovarian development and foxl2 mRNA expression in spotted scat Scatophagus argus［J］.J Fish Biol，2015，86(1)：248-260.
［11］QIN N，LIU Q，ZHANG Y Y，et al.Association of novel polymorphisms of forkhead box L2 and growth differentiation factor-9 genes with egg production traits in local Chinese Dagu hens［J］.Poult Sci，2015，94(1)：88-95.
［12］ELZAIAT M，JOUNEAU L，THÉPOT D，et al.High-throughput sequencing analyses of XX genital ridges lacking FOXL2 reveal DMRT1 up-regulation before SOX9 expression during the sex-reversal process in goats［J］.Biol Reprod，2014，91(6)：1-14，153.
［13］AUGUSTE A，CHASSOT A A，GRÉGOIRE E P，et al.Loss of R-spondin1 and Foxl2 amplifies female-to-male sex reversal in XX mice［J］.Sex Dev，2011，5(6)：304-317.
［14］PANNETIER M，ELZAIAT M，THÉPOT D，et al.Telling the story of XX sex reversal in the goat：highlighting the sex-crossroad in domestic mammals［J］.Sex Dev，2012，6(1-3)：33-45.
［15］PAILHOUX E，VIGIER B，CHAFFAUX S，et al.A 11.7-kb deletion triggers intersexuality and polledness in goats［J］.Nat Genet，2001，29(4)：453-458.
［16］张晶晶.无角间性奶山羊FOXL2基因及PIS区域变异研究［D］.保定：河北农业大学，2010.
ZHANG J J.Variation of PIS region and FOXL2 gene in the polled intersex dairy goat［D］.Baoding：Agricultural University of Hebei，2010.(in Chinese)
［17］PANNETIER M，RENAULT L，JOLIVET G，et al.Ovarian-specific expression of a new gene regulated by the goat PIS region and transcribed by a FOXL2 bidirectional promoter［J］.Genomics，2005，85(6)：715-726.
［18］夏江东，程在全，吴渝生，等.高等植物启动子功能和结构研究进展［J］.云南农业大学学报，2006，21(1)：7-14.
XIA J D，CHENG Z Q，WU Y S，et al.Advances of the studles on function and composition of plant promoter［J］.Journal of Yunnan Agricultural University，2006，21(1)：7-14.(in Chinese)
［19］ZHONG S，HE X，BAR-JOSEPH Z.Predicting tissue specific transcription factor binding sites［J］.BMC Genomics，2013，14：796.doi：10.1186/1471-2164-14-796.
［20］TRAN S，WANG Y，LAMBA P，et al.The CpG island in the murine foxl2 proximal promoter is differentially methylated in primary and immortalized cells［J］.PLoS One，2013，8(10)：e76642.
［21］ZHOU X Y，SUN J F，HE Y H，et al.Correlation of the methylation status of CpG islands in the promoter region of 10 genes with the 5-Fu chemosensitivity in 3 breast cancer cell lines［J］.Chinese Journal of Oncology，2010，32(5)：328-333.
［22］MCLNTOSH A L，ATSHAVES B P，HOSTETLER H A，et al.Liver type fatty acid binding protein(L-FABP) gene ablation reduces nuclear ligand distribution and peroxisome proliferator-activated receptor-alpha activity in cultured primary hepatocytes［J］.Arch Biochem Biophys，2009，485(2)：160-173.

[1]	王昌英, 鹿红宇, 隋敏敏, 王岩超, 刘根, 孙亿, 姜运良. 猪SERPINC1基因对PCV2复制的效应及其转录调控[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1545-1553.
[2]	杨涛, 许厚强, 陈伟, 周迪, 王圆圆, 朱晓锋. 牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1567-1575.
[3]	杨涛, 许厚强, 陈伟, 周迪, 王圆圆, 朱晓锋. 牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1567-1575.
[4]	王昌英, 鹿红宇, 隋敏敏, 王岩超, 刘根, 孙亿, 姜运良. 猪SERPINC1基因对PCV2复制的效应及其转录调控[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1545-1553.
[5]	王亚, 赵峰, 张虎, 党方昆, 高庆涛, 于耀, 杜中原, 萨仁娜. 猪仿生消化中消化酶活性随消化时间变化的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1412-1423.
[6]	宋鹏琰, 李佳丽, 苗艳平, 李相运, 周荣艳, 锡建中. 绵羊miR-150启动子的鉴定及生殖激素对其转录调控研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1358-1366.
[7]	刘宗立, 陈涛, 杨丹丹, 崔景香, 李川皓, 曾勇庆, 陈伟. 猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1328-1339.
[8]	王建蒙, 付绍印, 丽春, 白雪, 刘斌, 季小阳, 刘永斌, 张文广. 褪黑激素对内蒙古绒山羊皮肤中let-7家族及其靶基因的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1367-1379.
[9]	施会彬, 王玉琴, 张小辉, 吴至博, 杨芳. 基于转录组测序数据的山羊下丘脑组织繁殖相关信号通路及候选基因的筛选[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1380-1395.
[10]	刘宗立, 陈涛, 杨丹丹, 崔景香, 李川皓, 曾勇庆, 陈伟. 猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1328-1339.
[11]	宋鹏琰, 李佳丽, 苗艳平, 李相运, 周荣艳, 锡建中. 绵羊miR-150启动子的鉴定及生殖激素对其转录调控研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1358-1366.
[12]	王建蒙, 付绍印, 丽春, 白雪, 刘斌, 季小阳, 刘永斌, 张文广. 褪黑激素对内蒙古绒山羊皮肤中let-7家族及其靶基因的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1367-1379.
[13]	施会彬, 王玉琴, 张小辉, 吴至博, 杨芳. 基于转录组测序数据的山羊下丘脑组织繁殖相关信号通路及候选基因的筛选[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1380-1395.
[14]	王亚, 赵峰, 张虎, 党方昆, 高庆涛, 于耀, 杜中原, 萨仁娜. 猪仿生消化中消化酶活性随消化时间变化的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1412-1423.
[15]	彭孝坤, 赵天, 黄晓瑜, 张宇, 邢晓南, 张恩平. 急性热应激对山羊血液生化指标及血淋巴细胞热休克蛋白70家族基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1219-1229.

山羊卵巢维持基因FOXL2启动子活性及调控区域分析

Activity and Regulation Region Analysis of Promoter of Goat FOXL2 Gene

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价