enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.003

摘要/Abstract

摘要：

旨在深入研究内源性绵羊肺腺瘤病毒（enJSRV）囊膜蛋白在绵羊胎盘形成过程中的作用，本研究体外培养了蒙古绵羊绒毛膜滋养层细胞，采用RT-PCR技术扩增出enJSRV-env基因及其受体Hyal2基因全长序列，定向克隆于真核表达载体pEGFP-C1上。优化绒毛膜滋养层细胞电转染条件和测定电转效率。将构建好的真核表达质粒分别电转染到绒毛膜滋养层细胞中，在荧光显微镜下观察enJSRV囊膜蛋白及其受体Hyal2的瞬时表达情况。并研究高表达enJSRV-env基因及通过RNA干扰沉默enJSRV-env基因对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合活性的影响。结果显示，真核表达质粒构建成功，分别命名为pEGFP-C1/enJSRV-env及pEGFP-C1/Hyal2。研究表明，绵羊绒毛膜滋养层细胞最佳电转染条件为脉冲电压150 V，脉冲时间5.0 ms，电击2次，间隔50 ms。转染pEGFP-C1/enJSRV-env质粒及pEGFP-C1/enJSRV-env与pEGFP-C1/Hyal2共转染的绵羊绒毛膜滋养层细胞中多核细胞数目明显增加，平均每个视野分别可以观察到1.8和2.3个多核细胞。说明enJSRV-env对绒毛膜滋养层细胞的细胞融合有一定的促进作用。本研究为进一步探究enJSRV囊膜蛋白的结构和功能及绒毛膜滋养层细胞融合机理提供试验基础。

关键词: 内源性绵羊肺腺瘤病毒, 内源性逆转录病毒, 囊膜蛋白, 绒毛膜滋养层细胞, 细胞融合

Abstract:

This paper aimed to study the possible role of endogenous jaagsiekte sheep retrovirus（enJSRV） envelope protein in sheep placenta formation process.Chorionic trophoblast cells from Mongolian sheep were cultured in vitro.RT-PCR technique was used to amplify enJSRV-env gene as well as the full-length gene of its receptor Hyal2.The genes were then directionally cloned into the eukaryotic expression vector pEGFP-C1.The electric transfection conditions of the chorionic trophoblast cells were optimized and the electrical transfer efficiency was measured.The constructed eukaryotic expression plasmids were transfected into chorionic trophoblast cells by electroporation，and transient expressions of enJSRV envelope protein and its receptor Hyal2 were observed under a fluorescence microscope.The activity of cell fusion in chorionic trophoblast cells under high expression and RNA interference silencing of enJSRV-env gene was also observed.The results showed that eukaryotic expression plasmids were successfully constructed and named as pEGFP-C1/enJSRV-env and pEGFP-C1/Hyal2，respectively.The best transfection conditions were pulse voltage 150 V，pulse time 5.0 ms，electric shock number for 2 times with 50 ms interval.The number of multinucleated cells were significantly increased in the trophoblast cells which co-transfected pEGFP-C1/Hyal2 with the transfection of pEGFP-C1/enJSRV-env plasmid and pEGFP-C1/enJSRV-env.We observed 2.3 and 1.8 multinucleated cells in average per field.The enJSRV-env had a certain role in promoting the cell fusion of chorionic trophoblast cells.This study provides an experimental basis for further exploring the structure and function of enJSRV envelope protein and the fusion mechanism of chorionic trophoblast cells.

Key words: enJSRV, endogenous retroviruses, envelope protein, trophoblast cells, cell fusion

中图分类号:

S826.2

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