牛FABP3转基因小鼠的遗传及表达特性研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.10.007

摘要/Abstract

摘要：

旨在研究和分析牛FABP3基因在小鼠体内遗传和表达特性，对培育优质高产转基因肉牛新品种具有重要意义。本研究利用前期获得的4只FABP3转基因小鼠，通过制定的4组交配方案获得子代小鼠，并利用PCR、实时荧光定量PCR和组织原位表达技术对转基因牛FABP3基因小鼠的子代遗传特征，以及FABP3基因在G0代和G1代小鼠心、肝、肾、骨骼肌组织的表达情况进行了检测。RT-PCR检测结果表明，在G0代转基因小鼠中，牛FABP3基因能够表达；牛FABP3基因在转基因小鼠中可以遗传，G1代转基因小鼠平均阳性率达68.4%；相对定量PCR结果表明，转基因小鼠总FABP3基因在G1代小鼠心肌和骨骼肌中表达量相对于阴性个体有不同程度的增加；组织原位检测表明，在G0代个体中表达量较高，G1代个体中虽能看到绿色荧光，但略有降低。本研究表明，牛FABP3基因存在于小鼠基因组中，并能够被表达，且可以遗传给后代，这为后期进一步研究牛FABP3基因对小鼠骨骼肌脂肪含量的影响奠定坚实基础。

关键词: 牛, 脂肪酸结合蛋白3, 转基因, 小鼠, 脂肪

Abstract:

The study aimed to analyze the genetic characteristic and expression of bovine FABP3 gene in transgenic mice，which will play a key role in culturing the breeds that produced higher yield and improved quality by transgenic method.Four FABP3 transgenic mice were used，G1 generation mice were obtained by 4 mating schmes.The genetic characteristic and expression of bovine FABP3 in heart，liver，kidney and skeletal muscle of transgenic mice were investigated in this study by RT-PCR and fluorescent in situ hybridization.The results of RT-PCR showed that bovine FABP3 gene could be identified in G0 transgenic mice by RT-PCR and propagated to G1 offspring，too.The positive rate was 68.4% in G1 and FABP3 gene expression levels in heart，skeletal muscle of transgenic mice were much higher than that of negative controls by real-time PCR.Furthermore，the fluorescent in situ hybridization results showed that bovine FABP3 gene could be expressed in the heart，liver，kidney and skeletal muscle in G0，G1 mice，and the expression in G0 was higher than that in G1 mice.This study suggests that bovine FABP3 gene has been successfully integrated and expressed in the mouse DNA，and expressed in G1 mice.The result would help us guide beef cattle molecular genetic breeding in the future.

Key words: beef cattle, FABP3, transgenic, mouse, fat

中图分类号:

S823
S813.3

李娟，杜新华，陈燕，高雪，李俊雅，许尚忠. 牛FABP3转基因小鼠的遗传及表达特性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(10): 1750-1758.

LI Juan，DU Xin-hua，CHEN Yan，GAO Xue，LI Jun-ya，XU Shang-zhong. Study on Genetic Characteristic and Expression of Bovine FABP3 Gene in Transgenic Mice[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(10): 1750-1758.

参考文献

［1］GERBENS F，VAN ERP A J，HARDERS F L，et al.Effect of genetic variants of the heart fatty acid-binding protein gene on intramuscular fat and performance traits in pigs［J］.J Anim Sci，1999，77(4)：846-852.
［2］MORGAN J B，SAVELLl J W，HALE D S，et al.National beef tenderness survey［J］.J Anim Sci，1991，69(8)：3274-3283.
［3］ZANOTTI G.Muscle fatty acid-binding protein［J］.Biochim Biophys Acta，1999，1441(2-3)：94-105.
［4］DAY C.Metabolic syndrome，or what you will：definitions andepidemiology［J］.Diab Vasc Dis Res，2007，4(1)：32-38.
［5］ZHANG Y，KENT J W，LEE A，et al.Fatty acid binding protein 3(FABP3)isassociatedwithinsulin，lipids and cardiovascular phenotypes of themetabolic syndrome through epigenetic modificationsin a northern european family population［J］.BMC Med Genomics，2013，19，6：9.doi：10.1186/1755-8794-6-9.
［6］冯爱娟，陈东风.脂肪酸结合蛋白研究进展［J］.世界华人消化杂志，2003(9)：1457-1459.
FENG A J，CHEN D F.Fatty acid binding protein are reviewed［J］.World Chinese Journal of Digestology，2003(9)：1457-1459.(in Chinese)
［7］GERBENS F，DE KONING D J，HARDERS F L，et al.The effect of adipocyte and heart fatty acid binding protein genes on intramuscular fat and back fat content in Meishan crossbred pigs［J］.J Anim Sci，2000，78(3)：552-559.
［8］GERBENS F，VERBURG F J，VAN MOERKERK H T，et al.Associations of heart and adipocyte fatty acid-binding protein gene expression with intramuscular fat content in pigs［J］.J Anim Sci，2001，79(2)：347-354.
［9］HUANG Z G，XIONG L，LIU Z S，et al.The developmental changes and effect on IMF content of H-FABP and PPARgamma mRNA expression in sheep muscle［J］.J Genet Genomics，2006，33(6)：507-514.
［10］余刚，罗军，薛瑞，等.陕北白绒山羊H-FABP基因多态性及其与部分生产性能的相关研究［J］.安徽农业科学，2007a，(28)：8880-8881.
YU G，LUO J，XUE R，et al.Study on polymorphisms ofH-FABP gene and its relation with growth and carcass traits in Northern Shaanxi white cashmere goat［J］.Journal of Anhui Agricultural Sciences，2007a，(28)：8880-8881.(in Chinese)
［11］余刚，罗军，韩雪峰，等.陕北白绒山羊H-FABP基因SNPs及其与生长、胴体性状的相关研究［J］.畜牧兽医学报，2007，38(11)：1154-1159.
YU G，LUO J，HAN X F，et al.Study on SNPs of H-FABP gene and its relationship with growth and carcass traits in shanbei white cashmere goats［J］. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2007，38(11)：1154-1159.(in Chinese)
［12］余刚.陕北白绒山羊H-FABP基因内含子3的遗传多态性分析［J］.中国草食动物，2010(1)：5-8.
YU G.Analysis on the genetic polymorphism at the intron 3 ofH-FABPgene in shanbei white cashmere goats［J］.China Herbivores，2010(1)：5-8.(in Chinese)
［13］李武峰，许尚忠，曹红鹤，等.3个杂交牛种H-FABP基因第二内含子的遗传变异与肉品质性状的相关分析［J］.畜牧兽医学报，2004，35(3)：252-255.
LI W F，XU S Z，CAO H H，et al.Genetic variation in intron2 ofH-FABPgene in three bovine hybrids and the relationships with meat quality traits［J］. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2004，35(3)：252-255.(in Chinese)
［14］王卓，昝林森.秦川牛H-FABP基因第1外显子SNP及其与部分肉用性状相关性的研究［J］.西北农林科技大学学报(自然科学版)，2008，36(11)：11-15.
WANG Z，ZAN L S.Study on SNP ofH-FABPgene extron1and its association with some meat traits in Qinchuan cattle［J］.Journal of Northwest A & F University(Natural Science Edition)，2008，36(11)：11-15.(in Chinese)
［15］MORENO-SANCHEZ N，RUEDA J，MARIA J，et al.Skeletal muscle specific genes networks in cattle［J］.Funct Integr Genomics，2010，10(4)：609-618.
［16］马微，赵伟.后基因组时代转基因小鼠在生命科学中的研究进展［J］.医学综述，2011，17(9)：1286-1289.
MA W，ZHAO W.Research progress of trangsgenic mice in post-genomic era in life science［J］.Medical Recapitulate，2011，17(9)：1286-1289.(in Chinese)
［17］杜新华.PiggyBac转座子介导的脂肪代谢相关基因的转基因功能研究［D］.北京：中国农业科学院，2013.
DU X H.Transgenic research of fat metabolism genes mediated by piggybac transposon［D］.Beijing：Chinese Academy of Agricultural Sciences，2013.(in Chinese)
［18］杜新华，高雪，张路培，等.piggyBac转座子在牛基因组的整合位点及特征分析［J］.遗传，2013，35(6)：771-777.
DU X H，GAO X，ZHANG L P,et al.Integration sites and their characteristic analysis of piggyBac transposon in cattle genome［J］.Hereditas，2013，35(6)：771-777.(in Chinese)
［19］BONEN A，LUIKEN J J，LIU S，et al.Palmitate transport and fatty acid transporters in red and white muscles［J］.Am J Physiol， 1998，275(3 Pt 1)：E471-E478.
［20］ATSHAVES B P，MARTIN G G，HOSTETLER H A，et al.Liver fatty acid binding protein and obesity［J］. J Nutr Biochem，2010，21(11)：1015-1032.
［21］孔祥平，吴庆洲.复制型 HBV转基因小鼠遗传稳定性研究［J］.中国生物工程杂志，2008，28(5)：17-21.
KONG X P，WU Q Z.Thegenetic stability of replicating HBV transgenic mice［J］.China Biotechnology，2008，28(5)：17-21.(in Chinese)
［22］CHO S，PARK T S，YOON D H，et al.Identification of genetic polymorphisms in FABP3 and FABP4 and putative association with back fat thickness in Korean native cattle［J］.BMB Rep， 2008，41(1)：29-34.
［23］SERAO N V，VEROMEZE R，RIBEIRO A M，et al.Candidate gene expression and intramuscular fat content in pigs［J］. J Anim Breed Genet，2011，128(1)：28-34.
［24］ZHOU L，JIN J，SONG G，et al.α-Lipoic acid ameliorates mitochondrial impairment and reverses apoptosis in FABP3-overexp ressing embryonic cancer cells［J］.J Bioenerg Biomembr， 2013，45(5)：459-466.

[1]	王璟, 滑留帅, 陈俊峰, 张家庆, 任巧玲, 白红杰, 郭红霞, 徐照学, 邢宝松, 白献晓, 曹海. 去势对淮南公猪背最长肌转录组的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1746-1758.
[2]	韩小红, 何翃闳, 王靖雷, 张慧珠, 马悦, 马进彪, 赵生贤, 余四九, 崔燕, 樊江峰. 牦牛p38MAPK在雌性主要生殖器官中的表达[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1802-1812.
[3]	康浩然, 刘重阳, 于勇, 张俊杰, 潘子豪, 姚火春. 2017-2018年我国部分地区牛支原体的分离鉴定及多位点序列分型[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1857-1863.
[4]	赵凯, 崔燕, 刘鹏刚, 何俊峰, 宋亮丽, 廖博, 杨晓晴. IL-17和HSP90在不同牛肝中的定位和定量研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1897-1903.
[5]	邓天宇, 樊红樱, 杜立新, 赵福平, 王立贤. 呼伦贝尔羊重要脂肪相关基因mRNA差异表达分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1926-1935.
[6]	杨涛, 许厚强, 陈伟, 周迪, 王圆圆, 朱晓锋. 牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1567-1575.
[7]	罗芳, 郭延生, 马志远, 卢旺银, 李刚, 陶金忠. 基于UPLC-Q-TOF MS代谢组学技术筛选表征西门塔尔种公牛精子活力的候选生物标志物[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1596-1606.
[8]	温东旭, 张雷, 索朗斯珠, 牛家强, 王玉恒, 贡嘎, 旦巴次仁, 席广银, 郭敏, 徐业芬. 牦牛Nramp1基因mRNA组织表达谱及其相关miRNAs初步研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1576-1586.
[9]	张芮琪, 张莹利, 蒋明, 徐越, 徐永平, 卿素珠. 成纤维生长因子4在妊娠早期牛胎盘组织的分布及表达特点[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1685-1693.
[10]	杨涛, 许厚强, 陈伟, 周迪, 王圆圆, 朱晓锋. 牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1567-1575.
[11]	温东旭, 张雷, 索朗斯珠, 牛家强, 王玉恒, 贡嘎, 旦巴次仁, 席广银, 郭敏, 徐业芬. 牦牛Nramp1基因mRNA组织表达谱及其相关miRNAs初步研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1576-1586.
[12]	罗芳, 郭延生, 马志远, 卢旺银, 李刚, 陶金忠. 基于UPLC-Q-TOF MS代谢组学技术筛选表征西门塔尔种公牛精子活力的候选生物标志物[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1596-1606.
[13]	张芮琪, 张莹利, 蒋明, 徐越, 徐永平, 卿素珠. 成纤维生长因子4在妊娠早期牛胎盘组织的分布及表达特点[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1685-1693.
[14]	王书芳, 潘洋洋, 任端阳, 赵艳艳, 李宝钧, 乔利英, 刘文忠. miR-200c和miR-429靶向调节绵羊皮下脂肪细胞中SCD1表达的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1347-1357.
[15]	刘江静, 陈晓丽, 田宏志, 路永强, 王栋. 返情母牛活动量影响因素分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1405-1411.