非编码小RNA （RyhB）调控禽致病性大肠杆菌毒力相关基因的分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.017

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (8): 1409-1416.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.017

非编码小RNA （RyhB）调控禽致病性大肠杆菌毒力相关基因的分析

尹磊，祁克宗^*，涂健，周秀红，刘红梅，王曼，张艳娜

（安徽农业大学动物科技学院，合肥 230036）

收稿日期:2014-11-24 出版日期:2015-08-23 发布日期:2015-08-18
通讯作者: 祁克宗，教授，E-mail：qkz@ahau.edu.cn
作者简介:尹磊（1989-），男，安徽巢湖人，硕士，主要从事动物病理学研究，E-mail：ylshouhu1989@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31372402）

Analysis of the Regulation of Small Non-coding RNA (RyhB) on Avian Pathogenic Escherichia coli Virulence-related Genes

YIN Lei，QI Ke-zong^*，TU Jian，ZHOU Xiu-hong，LIU Hong-mei，WANG Man，ZHANG Yan-na

(College of Animal Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China)

Received:2014-11-24 Online:2015-08-23 Published:2015-08-18

摘要/Abstract

摘要：

以小RNA（RyhB）为研究对象，探索RyhB对禽致病性大肠杆菌相关毒力基因的调控研究。采用Red同源重组技术构建APEC野生株（AE17）RyhB的缺失株△RyhB以及构建出回复株△RyhB-comp。运用活菌计数法分别观察AE17、△RyhB、△RyhB-comp黏附鸡胚成纤维细胞DF-1的能力，并且利用Real-time PCR检测AE17、△RyhB和△RyhB-comp的 8个毒力基因转录水平。结果成功构建出了基因缺失株△RyhB和回复株△RyhB-comp，△RyhB黏附细胞能力较AE17均有显著地降低，约为AE17的62.5%，△RyhB-comp较△RyhB黏附能力显著上升，为△RyhB的1.4倍。同时，Real-time PCR结果显示，△RyhB的bcfA、fyuA、tsh、luxS、fimC、ompA毒力基因的转录水平均极显著下降（P＜0.01），其mRNA转录水平分别约为AE17的19%、52%、20%、14%、28%、52%；△RyhB的iss、ibeA毒力基因表达水平分别上调约1.14倍和1.2倍。表明RyhB的缺失能够减弱APEC黏附DF-1的能力，并且使毒力基因的转录水平有所降低。根据以上结果，推测RyhB对APEC的毒力具有极其重要的调节作用。

关键词: 禽致病性大肠杆菌, 非编码小RNA, Red同源重组, RyhB, 毒力基因

Abstract:

Taking small RNA（RyhB）as the object of study，the experiment explored the regulation of RyhB on avian pathogenic Escherichia coli (APEC) virulence-related genes.The Red homologous recombination method was used to construct the RyhB gene deletion strain (△RyhB) and the complemented strain (△RyhB-comp) by transforming the fusion plasmid pSTV28-RyhB into △RyhB.Viable bacteria counting method was used to evaluate the effects of AE17，△RyhB and △RyhB-comp on the capability of APEC to adhere and invade DF-1 cell.Their effects on the mRNA levels of the eight virulence genes were analyzed by Real-time PCR.The results showed that APEC strains △RyhB and △RyhB-comp were constructed successfully.The adherence of △RyhB was decreased by 62.5% compared to AE17，and that of △RyhB-comp was increased about 1.4 folds compared to △RyhB.Real-time PCR revealed that the transcription of bcfA, fyuA，tsh，luxS，fimC，ompA genes of △RyhB were decreased by 19%，52%，20%，14%，28% and 52%，respectively；while the iss and ibeA genes were increased about 1.14 folds and 1.2 folds respectively.It showed that the deletion of RyhB can reduce the adhesive power of APEC to DF-1 cells and decrease the transcription of virulence genes.Our study demonstrates that RyhB plays a very important role in regulating the virulence of APEC.

Key words: avian pathogenic Escherichia coli, small non-coding RNA, Red recombination, RyhB, the virulence genes

中图分类号:

S852.612

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非编码小RNA （RyhB）调控禽致病性大肠杆菌毒力相关基因的分析

Analysis of the Regulation of Small Non-coding RNA (RyhB) on Avian Pathogenic Escherichia coli Virulence-related Genes

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