WT1和FGF9基因在克隆猪隐睾中mRNA表达和DNA甲基化状态分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.009

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (6): 918-925.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.009

WT1和FGF9基因在克隆猪隐睾中mRNA表达和DNA甲基化状态分析

李芳芳^1,2,3，戴建军^1,2，吴彩凤 ^1,2，张树山 ^1,2，张德福^1,2*，顾晓龙^1,2，吴鋆龙 ^1,2,3，王昕^1,2,3

(1.上海农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106； 2.上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室，上海 201106；3.上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306)

收稿日期:2013-09-18 出版日期:2014-06-23 发布日期:2014-06-23
通讯作者: 张德福，E-mail：zhangdefuzdf@163.com
作者简介:李芳芳 (1988-)，女，山西吕梁人，硕士生，主要从事动物胚胎工程研究，E-mail：yimi1227@126.com
基金资助:
上海市科委农业成果转化专项（123919N0700）；上海市科委农业成果转化专项（133919N1700）；国家自然科学基金（31372315）；国家转基因生物新品种培育科技重大专项（2013ZX08006-005）

mRNA Expression and DNA Methylation Status of WT1 and FGF9 Genes in Cryptorchidism of Cloned Pigs

LI Fang-fang^1,2,3，DAI Jian-jun^1,2，WU Cai-feng^1,2,ZHANG Shu-shan^1,2，ZHANG De-fu^1,2*，GU Xiao-long^1,2，WU Yun-long^1,2,3，WANG Xin^1,2,3

(1.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai 201106， China; 2.Division of Animal Genetic Engineering，Shanghai Municipal Key Laboratory of Agrigenetics and Breeding，Shanghai 201106， China;3.College of Fisheries and Life Science，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306， China)

Received:2013-09-18 Online:2014-06-23 Published:2014-06-23

摘要/Abstract

摘要：

为探究本课题组获得的2头体细胞克隆猪隐睾症形成的可能原因，本研究利用相对荧光定量PCR技术检测了WT1和FGF9基因在睾丸组织中mRNA表达量变化，同时利用亚硫酸氢盐测序法分析了其启动子区CpG岛甲基化状态。结果表明：WT1和FGF9基因在2头克隆猪睾丸中表达量均高于对照组，其中克隆猪C1中2个基因的表达量与对照组相比差异明显（3.49、9.83 vs 1.00）。亚硫酸氢盐测序结果显示，WT1基因启动子区在克隆猪C1和C2中的甲基化程度没有明显变化，而FGF9基因启动子区2个CpG岛在克隆猪C1中甲基化程度高于对照猪N（94.54% vs 18.18%，71.11% vs 26.67%），而在克隆猪C2中不明显。综上表明：WT1基因的异常表达可能是引起克隆猪发生隐睾的原因之一，但其甲基化水平不是影响该基因异常表达的因素；克隆猪C1睾丸组织FGF9基因启动子区发生超甲基化，这可能导致其mRNA表达异常，从而成为诱导克隆猪隐睾发生的可能原因。

关键词: 隐睾, 克隆猪, 甲基化, 亚硫酸氢盐测序

Abstract:

In order to find out the possible causes of the cryptorchidism in cloned pigs which produced by our research group.The RT-PCR techniques and bisulfite salt sequencing analysis(BSP) was used to analysis the expression and promoter methylation status of the promoter CpG sites of WT1 and FGF9 genes in the testis of cloned boars.The results showed that，the expression of both genes in cloned pig C1 and C2 were higher than those of control group N，expression of WT1 and FGF9 genes in cloned pig C1 was much higher (3.49，9.83 vs 1.00).Bisulfite sequencing PCR results showed that there were no significant change of WT1 gene methylation in cloned pig C1 and C2，and the methylation level of the both CpG inslands in FGF9 gene of cloned pig C1 was much higher than those in N（94.54% vs 18.18%，71.11% vs 26.67%）.The cloned pig C2 was not significant.Results indicated that the abnormal expression of WT1 gene may be one of the reasons for cryptorchidism of the cloned pigs，but the WT1 gene methylation had no relation on this abnormal expression.The change of DNA methylation reprogramming of FGF9 gene occurred in the testis of cloned pigs，which effected normal expression levels of the FGF9 gene，suggested that it may be an important factor for the occurrence of cryptorchidism in the cloned pigs.

Key words: cryptorchidism, cloning pigs, methylation, bisulfite sequencing

中图分类号:

S828.2

李芳芳，戴建军，吴彩凤，张树山，张德福，顾晓龙，吴鋆龙,王昕. WT1和FGF9基因在克隆猪隐睾中mRNA表达和DNA甲基化状态分析[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(6): 918-925.

LI Fang-fang，DAI Jian-jun，WU Cai-feng,ZHANG Shu-shan，ZHANG De-fu，GU Xiao-long，WU Yun-long，WANG Xin. mRNA Expression and DNA Methylation Status of WT1 and FGF9 Genes in Cryptorchidism of Cloned Pigs[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(6): 918-925.

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WT1和FGF9基因在克隆猪隐睾中mRNA表达和DNA甲基化状态分析

mRNA Expression and DNA Methylation Status of WT1 and FGF9 Genes in Cryptorchidism of Cloned Pigs

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