猪圆环病毒2型感染仔猪肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录的变化

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.05.018

摘要/Abstract

摘要：

选用6头经ELISA和荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒2型（PCV2）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV)血清抗体和抗原均为阴性的普通断奶仔猪，无菌分离肺泡巨噬细胞（AMs），分为对照组和PCV2感染组（PCV2组）进行体外培养，分别在培养0、6、12、24和48 h收集AMs。间接免疫荧光法定位检测PCV2感染AMs情况；荧光定量PCR方法检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录量的变化。结果表明，TLR2 mRNA的转录量在感染后6 h迅速升高，12 h后又迅速下降，但仍显著高于对照组(P<0.01或P<0.05)，到48 h时恢复；TLR3 mRNA的转录量，攻毒后6和12 h显著高于对照组(P<0.05)，24和48 h时恢复到对照组水平；PCV2明显升高感染后12 h AMs 中TLR4 mRNA的转录(P<0.05)，而明显抑制感染后24和48 h的转录(P<0.05)；PCV2引起感染后6和12 h的AMs中TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录量显著升高(P<0.01或P<0.05)，而到感染后24和48 h又恢复到对照组水平。结果表明，PCV2可显著影响体外培养仔猪AMs TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的转录。

关键词: 猪圆环病毒2型, 荧光定量PCR, 肺泡巨噬细胞, Toll样受体

Abstract:

Six conventional piglets free of porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) were used in this experiment as detected by ELISA and fluorescence quantitative PCR.The alveolar macrophages (AMs) were isolated aseptically and divided into two groups，control group and PCV2 infection group (PCV2 group) and cultured in vitro.The AMs were collected at 0，6，12，24 and 48 hours post infection (hpi).The amount of PCV2 infected cells was observed by indirect immunofluorescence assay (IFA) and the mRNA transcription of TLR2，TLR3，TLR4，TLR7，TLR8 and TLR9 were detected by real-time PCR.The results show that the mRNA levels of TLR2 were significantly higher at 6，12 and 24 h (hpi) (P<0.01 or P<0.05)，then the levels were recovered at 48 hpi.The expression of TLR3 were significantly elevated at 6 and 12 hpi (P<0.05)，and the transcription were then restored at 24 and 48 hpi; PCV2 stimulation up-regulated the transcriptions of TLR4 in AMs at 12 hpi (P<0.05) and down-regulated the transcriptions at 24 and 48 hpi (P<0.05); PCV2-infection increased TLR7，TLR8 and TLR9 transcriptions in AMs at 6 and 12 hpi (P<0.01 or P<0.05) and their of transcriptions were restored at 24 and 48 hpi.Thus，PCV2 can significantly affect TLR2，TLR3，TLR4，TLR7，TLR8 and TLR9 transcriptions in piglets AMs in vitro.

Key words: porcine circovirus type 2, RT-PCR, alveolar macrophages, Toll like receptors

中图分类号:

S858.285.3

张亚群，韩俊源，郭华，陈萌萌，段滇宁，张书霞. 猪圆环病毒2型感染仔猪肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录的变化[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(5): 802-808.

ZHANG Ya-qun， HAN Jun-yuan， GUO Hua， CHEN Meng-meng， DUAN Dian-ning， ZHANG Shu-xia. Changes of Toll-like Receptor mRNA Transcription in Alveolar Macrophages of Piglets Infected with Porcine Circovirus Type 2[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(5): 802-808.

参考文献

［1］SEGALÉS J，ALLAN G M，DOMINGO M.Porcine circovirus diseases［J］.Anim Health Res Rev，2005，6(2):119-142.
［2］郎洪武，张广川，吴发权，等.断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测［J］.中国兽医科技，2000，30(3):3-5.
［3］陈耿，华利忠，张书霞.猪圆环病毒Ⅱ型和巨噬细胞对体外培养仔猪淋巴细胞白介素-6和白介素-10及其受体表达的影响［J］.江苏农业学报，2010，26(5): 993-998.
［4］DARWICH L，BALASCH M，PLANA-DURN J，et al.Cytokine profiles of peripheral blood mononuclear cells from pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome in response to mitogen，superantigen or recall viral antigens ［J］.J Gen Virol，2003，84(Pt12):3453-3457.
［5］MEDZHITOV R，PRESTON-HURLBURT P，JANEWAY C A.A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity［J］.Nature，1997，388(6640):394-397.
［6］王平忠，白雪帆，黄长形，等.Toll样受体介导的抗病毒天然免疫［J］.细胞与分子免疫学杂志，2008，24（5）：539-541.
［7］付金玲,李其林.Toll 样受体与病毒感染的研究现状［J］.中国皮肤性病学杂志，2009，23(1):57-58.
［8］LIU C H，CHAUNG H C，CHANG H L，et al.Expression of Toll-like receptor mRNA and cytokines in pigs infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus［J］.Vet Microbiol，2009，136(3-4):266-276.
［9］陈耿，赵焱，包银莉,等.PCV2 对体外培养仔猪脾细胞分泌细胞因子的动态影响［J］.畜牧与兽医，2009，41(9):58-60.
［10］陈耿，张书霞，华利忠.PCV2对仔猪胸腺IL-2，IL-6 和IL-10及其受体mRNA的影响及NO-NOS系统的调控［J］.南京农业大学学报，2011，34(3):101-106.
［11］李晓琳，郭华，刘子臣，等.PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞TLRs的影响［J］.南京农业大学学报，2013，36（5）：93-98.
［12］LIU J，BAI J，LU Q，et al.Two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry coupled with isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ) labeling approach revealed first proteome profiles of pulmonary alveolar macrophages infected with porcine circovirus type 2 ［J］.J Proteomics，2013，79:72-86.
［13］CHANG H W，JENG C R，LIN T L，et al.Immunopathological effects of porcine circovirus type 2 (PCV2) on swine alveolar macrophages by in vitro inoculation［J］.Vet Immunol Immunopathol，2006，110(3-4): 207-219.
［14］施旅娟，韩惠利，张书霞.PCV2感染仔猪淋巴结中的病毒定位与细胞凋亡［J］.中国农业科学，2008，41(1):237-242.
［15］AKIRA S，TAKEDA K.Toll-like receptor signalling［J］.Nat Rev Immunol，2004，4(7):499-511.
［16］KAWAI T,AKIRA S.TLR signaling［J］.Cell Death Differ，2006，13(5):816-825.
［17］MEDZHITOV R，PRESTONHU R P，JANEWAY C J.A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity ［J］.Nature，1997，388(6640):394-397.
［18］POLTORAK A，SMIRNOVA I，HE X，et al.Genetic and physical mapping of the Lps locus: identification of the toll-4 receptor as a candidate gene in the critical region ［J］.Blood Cells Mol Dis，1998，24(3):340-355．
［19］王景锋,邵军军,常惠芸，等.病毒固有免疫识别受体研究进展［J］.细胞与分子免疫学杂志，2009，25（12）：1217-1220.
［20］CHIU Y H，MACMILLAN J B，CHEN Z J.RNA polymerase III detects cytosolic DNA and induces type I interferons through the RIG-I pathway［J］.Cell，2009,138(3):576-591.
［21］YAMAMOTO M，AKIRA S.Mechanisms of innate immune response mediated by Toll-like receptors［J］.Applied Immunol Rev，2005(5):167-183.
［22］UENISHI H，SHINKAI H.Porcine Toll-like receptors: The front line of pathogen monitoring and possible implications for disease resistance［J］.Dev Comp Immunol，2009，33(3):353-361.
［23］CHAUNG H C，CHEN C W，HSIEH B L，et al.Toll-like receptor expressions in porcine alveolar macrophages and dendritic cells in responding to poly IC stimulation and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection［J］.Comp Immunol Microbiol Infect Dis，2010，33(3):197-213.
［24］CHANG H W，JENG C R，LIU J J，et al.Reduction of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection in swine alveolar macrophages by porcine circovirus 2 (PCV2)-induced interferon-alpha［J］.Vet Microbiol，2005，108(3-4):167-177.
［25］韩惠利，张书霞，施旅娟.PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞凋亡的影响［J］,南京农业大学学报，2008,31（1）：92-95.
［26］HUA L Z，SUN Y，ZHANG S X，et al.The Fas/FasL pathway mediates apoptosis of splenic lymphocytes in piglets infected with PCV2［J］.J Chem Soc Pak，2011，33(3)：395-402.
［27］KRIEG A M，WU T，WEERATNA R，et al.Sequence motifs in adenoviral DNA block immune activation by stimulatory CpG motifs［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，1998，95(21):12631-12636.

[1]	王素华, 帅江冰, 李舟, 袁淑辉, 吴绍强, 吕继洲, 赵治国. 炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测技术的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1658-1665.
[2]	王素华, 帅江冰, 李舟, 袁淑辉, 吴绍强, 吕继洲, 赵治国. 炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测技术的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1658-1665.
[3]	刘豪丽, 滕蔓, 李会珍, 余祖华, 刘金玲, 丁轲, 张改平, 罗俊. 马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1026-1038.
[4]	刘豪丽, 滕蔓, 李会珍, 余祖华, 刘金玲, 丁轲, 张改平, 罗俊. 马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1026-1038.
[5]	李艳红, 刘洁, 李伟平, 崔雨婷, 彭远义, 吴正理. 牛A型巴氏杆菌高、低毒力株LPS激活RAW264.7细胞TLR4信号通路的比较分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 620-626.
[6]	李艳红, 刘洁, 李伟平, 崔雨婷, 彭远义, 吴正理. 牛A型巴氏杆菌高、低毒力株LPS激活RAW264.7细胞TLR4信号通路的比较分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(3): 620-626.
[7]	李锐, 高海侠, 徐军, 王瑞, 王文静, 张瑞良, 赵霞, 李琳. RNA-Seq分析baeSR和acrB对鼠伤寒沙门菌相关毒力基因表达的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(11): 2318-2325.
[8]	刘存, 邓永, 梁琳, 李金祥, 张彦明, 崔尚金. 牛病毒性腹泻病毒链特异性SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(10): 2079-2087.
[9]	胡会龙, 魏小兵, 王秋霞, 欧长波, 闫艺婷, 吕玉琼, 刘兴友. 发酵饲料中乳酸菌含量检测的EMA-qPCR方法[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(10): 2166-2170.
[10]	李畅, 李静, 何启盖. 猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 115-125.
[11]	李畅, 李静, 何启盖. 猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 115-125.
[12]	廖博, 崔燕, 杨雪, 何俊峰, 宋亮丽, 杨晓晴, 刘鹏刚. HSP70在牦牛肠道中的分布与变化规律[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(8): 1735-1742.
[13]	廖博, 崔燕, 杨雪, 何俊峰, 宋亮丽, 杨晓晴, 刘鹏刚. HSP70在牦牛肠道中的分布与变化规律[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(8): 1735-1742.
[14]	万春和, 刘荣昌, 程龙飞, 傅光华, 施少华, 陈红梅, 傅秋玲, 黄瑜. 鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(7): 1558-1566.
[15]	万春和, 刘荣昌, 程龙飞, 傅光华, 施少华, 陈红梅, 傅秋玲, 黄瑜. 鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(7): 1558-1566.