RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.05.010

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (5): 750-756.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.05.010

RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建

徐正刚，杨伦，曾勇庆^*，张哲，陈伟，杨云，房国锋，王守栋

（山东农业大学动物科技学院，泰安 271018）

收稿日期:2013-12-12 出版日期:2014-05-23 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 曾勇庆，教授，博士生导师，主要从事动物遗传育种学研究，E-mail：yqzeng@sdau.edu.cn
作者简介:徐正刚（1986-），男，山东烟台人，硕士生，主要从事动物遗传育种学研究，E-mail：346125802@qq.com
基金资助:
国家转基因重大专项（2011ZX08006-002；2013ZX08006-002）；国家高技术研究发展计划（863计划）重点项目（2008AA101008）；山东省现代农业（生猪）产业技术体系建设专项（SDAIT-06-011-02）；山东省农业良种工程重大项目（2011LZ013-03）

Construction of Transgenic Rabbit Model by RNA Interferencing PID1 Gene

XU Zheng-gang， YANG Lun， ZENG Yong-qing^*， ZHANG Zhe， CHEN Wei， YANG Yun， FANG Guo-feng， WANG Shou-dong

（College of Animal Science and Technology，Shandong Agricultural University，Tai’an 271018， China）

Received:2013-12-12 Online:2014-05-23 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要：

为进一步研究PID1基因的功能，本试验在前期构建并筛选得到的高效PID1 RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo-PID1-2的基础上，利用精子介导法制备RNA干扰PID1转基因肉兔模型。对繁殖的F₁代肉兔个体进行活体荧光检测、PCR、RT-PCR和Western blot检测，并对不同组别（阳性组、阴性组和空白对照组）体重达3.0 kg左右的F₁代肉兔抽样屠宰进行肌内脂肪的测定。研究结果表明：外源基因和绿色荧光蛋白基因（GFP）在转基因兔后代中可成功表达，试验组得到F₁代个体106只，其中阳性兔7只，转基因阳性率为6.60%。PID1基因RNAi阳性兔与阴性兔、空白对照兔相比，RT-PCR检测PID1基因 mRNA表达量显著降低（P<0.05），Western blot测得PID1蛋白表达水平呈下降趋势，肌内脂肪的含量显著降低(P<0.05)；综上表明，PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关。本研究从RNAi肉兔模型构建的角度进一步验证了PID1基因对肌内脂肪沉积影响的功能，也为下一步研究制备高肌内脂肪优质PID1转基因猪奠定了基础。

关键词: 新西兰肉兔, PID1基因, RNA干扰, 肌内脂肪

Abstract:

For the further research of PID1 gene function，transgenic rabbit model was constructed by use of sperm-mediated gene transfer on the basis of the PID1-shRNA expression vector pGPU6/GFP/Neo-PID1-2 preliminarily built and screened.Offsprings were detected by fluorescence detection in vivo，PCR，RT-PCR and Western blot.Individuals from different groups(positive group，negative group and blank group) were selected at the weight of about 3.0 kg and slaughtered to determine their intramuscular fat contents.The results showed that exogenous gene and green fluorescent protein (GFP) gene can be successfully expressed in transgenic offspring rabbits with transgenic positive rate 6.60% (7/106).Compared with the negative and blank groups，the mRNA expression level of the positive rabbits decreased significantly which was detected by RT-PCR (P<0.05).Western blot detection indicated that protein expression level showed a downward trend.Intramuscular fat content also decreased significantly (P<0.05).The results indicated that PID1 gene was closely related to the intramuscular fat deposition.The study further validated the function of PID1 gene in intramuscular fat deposition from the perspective of RNA interference model.What’s more，the study laid the foundation for preparation of high quality PID1 transgenic pigs with high intramuscular fat content.

Key words: New Zealand rabbit, PID1 gene, RNA interference, intramuscular fat

中图分类号:

徐正刚，杨伦，曾勇庆，张哲，陈伟，杨云，房国锋，王守栋. RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(5): 750-756.

XU Zheng-gang， YANG Lun， ZENG Yong-qing， ZHANG Zhe， CHEN Wei， YANG Yun， FANG Guo-feng， WANG Shou-dong. Construction of Transgenic Rabbit Model by RNA Interferencing PID1 Gene[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(5): 750-756.

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RNA干扰沉默PID1基因肉兔模型的构建

Construction of Transgenic Rabbit Model by RNA Interferencing PID1 Gene

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