副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.017

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (4): 621-630.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.017

副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

张飞¹,都启晶¹,张洋溢¹,文心田^1,2,3*,黄小波^1,2,3,曹三杰^1,2,3

(1．四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心，雅安 625014；2.四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室，成都 611130；3.农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站，雅安 625014)

收稿日期:2013-09-09 出版日期:2014-04-23 发布日期:2014-04-22
通讯作者: 文心田，E-mail:xintian@sicau.edu.cn
作者简介:张飞（1987-），男，河南尉氏人，硕士，主要从事动物传染病的研究工作，E-mail：zhf19861016@126.com
基金资助:
公益性行业（农业）科研专项（201303034-1）

Expression and Immunogenicity Analysis of Capsular Polysaccharide Export Protein of Haemophilus parasuis SC-1 Isolate

ZHANG Fei¹，DU Qi-jing¹，ZHANG Yang-yi¹，WEN Xin-tian^1,2,3*，HUANG Xiao-bo^1,2,3，CAO San-jie^1,2,3

(1.Swine Research Center，Institute of Preventive Veterinary Medicine，Sichuan Agricultural University，Ya’an 625014, China; 2.Laboratory of Zoonosi，College of Veterinary Medicine，Sichuan Agricutural University，Chengdu 611130, China; 3.Sichuan Science-observation Experiment of Veterinary Drugs and Veterinary Biological Technology of Ministry of Agriculture，Ya’an 625014， China)

Received:2013-09-09 Online:2014-04-23 Published:2014-04-22

摘要/Abstract

摘要：

运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白（CPEP）基因，克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后，将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体，构建原核表达质粒pET-32a-CPEP，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性，纯化CPEP，并用纯化的蛋白免疫小鼠，检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示，成功构建原核表达质粒pET-32a-CPEP；SDS-PAGE分析结果显示，得到约35 ku的蛋白；Western blot分析显示，CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应，证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠，重组蛋白的免疫能够减缓发病，并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子，为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。

关键词: 副猪嗜血杆菌, 荚膜多糖输出蛋白基因, 克隆表达, 免疫原性

Abstract:

Capsular polysaccharide export protein (CPEP) gene of Haemophilus parasuis SC-1 was amplified by PCR and then was cloned into the pMD-19T vector.After being certified by sequence and digestion with BamHⅠand XhoⅠ respectively，the gene were cloned into the pET-32a(+) vector.The recombinant vector was transformed into BL21（DE3）and then induced by IPTG.The product of expression was studied by SDS-PAGE and Western blot，and then was purified.We further evaluated the immune responses and protective efficacy of purified CPEP in mice models.The results showed that the recombinant vector pET32a-CPEP was constructed successfully.The SDS-PAGE and the western blot results showed that the purified protein was 35 kDa and the recombinant CPEP possessed reactogenicity respectively.The protective capacity of the anti-CPEP antibodies was evaluated by the inoculation of highly virulent strain SC-1.Vaccinated animals had a delayed course of disease and 40% of the animals survived the lethal challenge.The partial protection achieved with the recombinant CPEP supports their potential as candidates to be included in future vaccine formulations against H.parasuis.

Key words: Haemophilus parasuis, capsular polysaccharide export protein gene, expression, immunogenicity analysis

中图分类号:

S852.61

张飞,都启晶,张洋溢,文心田,黄小波,曹三杰. 副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(4): 621-630.

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副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

Expression and Immunogenicity Analysis of Capsular Polysaccharide Export Protein of Haemophilus parasuis SC-1 Isolate

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