猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.02.014

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (2): 262-267.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.02.014

猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

刘茂军^1,2，张悦^1,2，杜改梅¹，白昀¹，王海燕¹，姜平²，邵国青^1*

（1.江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014；2.南京农业大学动物医学院，南京 210095）

收稿日期:2013-08-27 出版日期:2014-02-23 发布日期:2014-03-07
通讯作者: 邵国青，Tel：025-84391973，E-mail:gqshaonj@163.com
作者简介:刘茂军（1977-），男，博士生，副研究员，山西阳曲人，主要从事动物传染病防控研究，Tel:025-84391689，E-mail:maojunliu@163.com
基金资助:
江苏省农业科技自主创新资金［CX（13）3066］

Prokaryotic Expression and Immunogenicity Identification of P65 from Mycoplasma hyopneumoniae

LIU Mao-jun^1,2，ZHANG Yue^1,2，DU Gai-mei¹，BAI Yun¹，WANG Hai-yan¹，JIANG Ping²，SHAO Guo-qing^1*

(1.Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology of Ministry of Agriculture，National Center for Engineering Research of Veterinary Bioproducts，Institute of Veterinary Medicine，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，China; 2.College of Veterinary Medicine，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China)

Received:2013-08-27 Online:2014-02-23 Published:2014-03-07

摘要/Abstract

摘要：

P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白，与其他支原体无交叉反应，常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本研究通过基因合成获得P65基因中含有3个稀有密码子的前922 bp，利用PCR从Mhp168株扩增获得P65基因后段，然后通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)将前后段连接后，克隆入pET-32a(+)中，获得重组质粒pET-32a(+)/mhp P65，经IPTG诱导获得87 ku的重组融合蛋白，Western blot分析表明其与Mhp血清呈强阳性反应。将该重组蛋白免疫小鼠获得了高滴度的特异性抗体，表明该蛋白具有良好的免疫原性。本研究成功表达了可溶性的Mhp P65融合蛋白，其具有较好的免疫原性，这为猪肺炎支原体P65蛋白的功能研究以及诊断学方法的建立和亚单位疫苗的研制提供了帮助。

关键词: 猪肺炎支原体, P65基因, 原核表达, 免疫原性

Abstract:

Protein P65，the immunodominance protein of Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp)，and shows no cross reaction with other Mycoplasmas，is usually used as the target protein or gene for Mhp detection.In this study，the front 922 bp fragment containing three rare codons in P65 gene was obtained by gene synthesis，and the other fragment of P65 gene was amplified by PCR from Mhp 168 strain，then the mutated P65 gene was obtained through the Splicing by overhang extension (SOE-PCR) with the surplus segment connection，finally the recombinant plasmid pET-32a(+)/P65 was constructed by inserting the mutated P65 gene into expression vector pET-32a(+).Under IPTG induction，E.coli BL21(DE3)/pET-32a(+)/P65 expressed the recombinant P65 protein with 87 kD.The result of Western blot analysis showed that the recombinant protein has satisfactory immunoreactivity.High level of antibody was obtained in BALB/c mice after inoculating the recombinant P65 protein，which indicated the recombinant P65 protein has a good immunogenicity.We had successfully obtained the recombinant P65 protein of Mhp by expressing in the E.coli，it provide the support for Mhp detection and subunit vaccine，and also offers the help for the further study of the pathogenic mechanism of this disease.

Key words: Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp), P65 gene, prokaryotic expression, immunogenicity

中图分类号:

S852.62

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猪肺炎支原体P65基因原核表达及免疫原性分析

Prokaryotic Expression and Immunogenicity Identification of P65 from Mycoplasma hyopneumoniae

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