非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.11.019

畜牧兽医学报 ›› 2013, Vol. 44 ›› Issue (11): 1832-1837.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.11.019

非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用

龚振华¹，王丽萍^1,2，臧京帅²，张康^1,2，刘春菊¹，吴晓东¹，张启迪²，秦晓冰²，陈琳琳²，单虎^2*，王树双¹，王志亮^1*

（1.中国动物卫生与流行病学中心，青岛266032；2.青岛农业大学动物科技学院，青岛266109）

收稿日期:2013-09-04 出版日期:2013-11-23 发布日期:2013-11-23
通讯作者: 王志亮，研究员，E-mail：zlwang111@163.com；单虎，教授，E-mail：shanhu67@163.com
作者简介:龚振华（1968-），男，湖南岳阳人，副研究员，主要从事动物疫病诊断技术研究；王丽萍（1988-），女，山东青岛人，硕士生，主要从事动物传染病诊断与生物制品研究，E-mail: gzh1832@126.com,Tel： 0532-85652282。二人并列为第一作者
基金资助:
公益性行业科技专项-非洲猪瘟等重大外来动物疫病防控技术研究（200903037）

Studies on the Efficient Expression of African Swine Fever Virus p54 Protein and Its Antigenic Analysis in ELISA

GONG Zhen-hua¹, WANG Li-ping^1,2, ZANG Jing-shuai², ZHANG Kang^1,2, LIU Chun-ju¹, WU Xiao-dong¹, ZHANG Qi-di², QIN Xiao-bing², CHEN Lin-lin², SHAN Hu^2*, WANG Shu-shuang¹, WANG Zhi-liang^1*

(1. China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032, China; 2.College of Animal Science and Technology, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China)

Received:2013-09-04 Online:2013-11-23 Published:2013-11-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在高效原核表达非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白，并进一步将其用于ELISA试验研究。参考非洲猪瘟病毒 Con09/Bzz020 株P54基因 (E183L)的核苷酸序列，通过序列优化后合成 P54基因，克隆至表达载体 pET-30c(+)，构建重组质粒 pET-30c(+)-p54。结果显示，pET-30c(+)-p54有完整的阅读框架，可高效表达分子量约 20.7 ku的p54 蛋白，该蛋白表达稳定，具有可溶性，易于纯化，纯度高达900 μg·mL^-1，所表达的p54蛋白的氨基酸序列与Con09/Bzz020 株p54蛋白氨基酸序列相同；Western blot试验显示，表达的p54蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性反应；ELISA试验显示，p54蛋白针对ASFV阳性血清和阴性血清的P/N值为4.67。研究结果证实p54蛋白表达产量高，易于纯化，具有较好的抗原性，可用于非洲猪瘟ELISA诊断。

关键词: 非洲猪瘟病毒, p54蛋白, ELISA

Abstract:

In this study, p54 protein of African swine fever virus (ASFV) was prokaryotically expressed efficiently, and the expressed p54 protein was tested to be specific to ASFV in ELISA. A sequence-optimized P54 gene was synthesized with reference of P54 gene (E183L) sequence of ASFV Con09/Bzz020 strain, the synthesized ASFV P54 gene was cloned into pET-30c(+) and the recombinant plasmid pET-30c(+)-p54 was obtained. Nucleotide sequence analysis of pET-30c(+)-p54 showed that the synthesized sequence-optimized P54 gene was cloned successfully into pET-30c(+) with the right reading frame. The p54 fusion protein with approximately 20.7 kDa was expressed efficiently, solubly and stably, and easily to be purified with the purity at 900 μg·mL^-1, the expressed p54 protein had the same amino acid sequence as the p54 protein of Con09/Bzz020, the expressed p54 protein was tested to be specific to anti-ASFV serum in Western-blot and had a P/N value of ASFV at 4.67 in ELISA. The results suggested that the expressed p54 protein with high yield was easy to be purified and was specific to anti-ASFV sera, and it could be used for diagnosis of ASFV by ELISA.

Key words: African swine fever virus, p54 protein, ELISA

中图分类号:

S852.659.1

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非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用

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