猪源多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆、表达

畜牧兽医学报 ›› 2005, Vol. 36 ›› Issue (7): 701-704.

猪源多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆、表达

吴斌;唐先春;陈焕春;王大鹏

华中农业大学动物病原微生物实验室, 武汉 430070

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-07-25 发布日期:2005-07-25

Cloning and Expression of the ompH Gene of Pasteurella multocida

WU Bin;TANG Xian-chun;CHEN Huan-chun;WANG Da-peng

Animal Pathogenic Microorganism Lab, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2005-07-25 Published:2005-07-25

摘要/Abstract

摘要： 利用已分离的菌株030224HB，根据NCBI上的序列（U52208）设计了一对引物，用PCR方法扩增了猪源多杀性巴氏杆菌的外膜蛋白基因（ompH），扩增的片段大小为1 114 bp（ORF为960 bp），并克隆到载体pMD18-T(T-Vector)，测序表明该基因相当保守。用pET-28b构建了原核表达载体pET28b-ompH，转化BL21并诱导表达，SDS-PAGE结果显示表达蛋白约为35 ku，与报道大小相近。Western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物学活性，然后用所表达的蛋白做了ELISA检测方法的初步探讨。

关键词: 多杀性巴氏杆菌, ompH基因, 克隆, 原核表达, ELISA

Abstract: Using the isolated strain of 030224HB and a set of specific primers, the ompH gene of P. multocida was amplified by PCR. The primers were designed based on the published sequences of the ompH gene. The 1 114 bp amplified DNA fragment was cloned into pMD18-T. The sequencing result indicated that this gene was quite conservative. The ompH gene in pMD18-T was ligated into pET28b to get the expressing vector of pET28b-ompH which was then transformed into E.coli BL21. The result of SDS-PAGE shows the expressed protein is about 35 ku, resembled to the published researches. Western-blot results indicates that this protein possesses biological activity. Using the expressed protein, ELISA to detect pasteurellosis of pigs is expected to develop.

Key words: Pasteurella multocida, ompH gene, cloning, prokaryotic expression, ELISA

吴斌;唐先春;陈焕春;王大鹏. 猪源多杀性巴氏杆菌ompH基因的克隆、表达[J]. 畜牧兽医学报, 2005, 36(7): 701-704.

WU Bin;TANG Xian-chun;CHEN Huan-chun;WANG Da-peng. Cloning and Expression of the ompH Gene of Pasteurella multocida[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2005, 36(7): 701-704.

[1]	欧阳清渊, 王郁石, 胡深强, 李亮, 刘贺贺, 何桦, 王继文. GATA4/5/6基因克隆及其在出生后鸭心脏和肝脏中的发育性表达模式[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1775-1786.
[2]	高俊莹, 张东超, 李璇, 王华琳, 姜宁. 弓形虫表面抗原SAG1黏附宿主细胞表面硫化肝素的特性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1874-1881.
[3]	王盼举, 樊新丽, 张梦圆, 宋晶晶, 李敏, 吾力江, 巴音查汗. 地方株马驽巴贝斯虫Bc48截短体单克隆抗体的制备及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1882-1887.
[4]	侯林杉, 贾敬亮, 顾文源, 刘宝京, 师乾凯, 袁广富, 陈少杰, 范京惠, 左玉柱. 基于猪丁型冠状病毒重组S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1642-1648.
[5]	杨振兴, 朱沛, 李占鸿, 廖德芳, 朱建波, 肖雷, 谢佳芮, 李华春, 杨恒. 我国牛羊中山病血清学调查[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1715-1722.
[6]	侯林杉, 贾敬亮, 顾文源, 刘宝京, 师乾凯, 袁广富, 陈少杰, 范京惠, 左玉柱. 基于猪丁型冠状病毒重组S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1642-1648.
[7]	杨振兴, 朱沛, 李占鸿, 廖德芳, 朱建波, 肖雷, 谢佳芮, 李华春, 杨恒. 我国牛羊中山病血清学调查[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(8): 1715-1722.
[8]	刘宗立, 陈涛, 杨丹丹, 崔景香, 李川皓, 曾勇庆, 陈伟. 猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1328-1339.
[9]	刘宗立, 陈涛, 杨丹丹, 崔景香, 李川皓, 曾勇庆, 陈伟. 猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1328-1339.
[10]	张跃博, 欧阳峰正, 王立刚, 侯欣华, 刘欣, 颜华, 张龙超, 王立贤. 猪ADAR1基因cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1135-1144.
[11]	唐泽群, 罗海燕, 葛铭, 郭荣, 许丹蕾, 张瑞莉. 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1292-1300.
[12]	张跃博, 欧阳峰正, 王立刚, 侯欣华, 刘欣, 颜华, 张龙超, 王立贤. 猪ADAR1基因cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1135-1144.
[13]	唐泽群, 罗海燕, 葛铭, 郭荣, 许丹蕾, 张瑞莉. 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1292-1300.
[14]	彭忠, 梁婉, 艾伟诚, 王斐, 华琳, 汤细彪, 陈焕春, 吴斌. 我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1064-1072.
[15]	彭忠, 梁婉, 艾伟诚, 王斐, 华琳, 汤细彪, 陈焕春, 吴斌. 我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1064-1072.