徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (6): 772-778.

徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

秦玉蓉，许峰，田智泉，高波，张振韬，阴彦辉，孙敏，李碧春*

扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-06-25 发布日期:2011-06-25
通讯作者: 李碧春

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-06-25 Published:2011-06-25

摘要/Abstract

摘要： 旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA，并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。本研究通过RTPCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA，并初步进行生物信息学分析，构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFPC1LPL。聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFPC1LPL转染NIH3T3细胞，48 h后在荧光倒置显微镜下观察，并用RTPCR方法检测LPL mRNA在细胞内的表达。结果，成功克隆出山羊LPL基因1 530 bp长的cDNA，完整阅读框大小为1 437 bp，共编码478个氨基酸，GenBank登录号为GU082383。信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列，其可能性为100%。信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间，其可能性达到65.9%。成功构建融合表达载体pEGFPC1LPL，并且RTPCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显。EGFPLPL融合蛋白定位在NIT3T3细胞外和细胞膜部分。结果表明，首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA；重组质粒pEGFPC1LPL构建成功，并在NIH3T3细胞中明显表达。

关键词: 脂蛋白酯酶基因, 真核表达, NIH3T3细胞, 绿色荧光蛋白

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