摘要: 本研究旨在探明鸡恒定链跨膜区特定氨基酸在形成MHCⅡIi复合物聚合中的作用特征。用大引物PCR定点突变法将鸡Ii链跨膜区2个氨基酸Gln47和Thr50分别突变为丙氨酸(Ala),再连接到pEGFPC1载体中,构建含IiGFP融合基因的真核表达载体。同时还分别构建了含pDsRed2N1MHCⅡα、pDsRed2N1MHCⅡβ、pEGFP N1MHCⅡα和pEGFP N1MHCⅡβ真核表达载体。用脂质体介导法将这些重组质粒单独或共转染至COS7细胞,培养48 h后经荧光显微镜检测野生型Ii和突变型Ii与MHCⅡ类分子的细胞定位,并通过免疫共沉淀研究它们之间的相互关系。结果显示,野生型Ii链与MHCⅡα或MHCⅡβ之间存在细胞内的共定位,而突变型Ii与MHCⅡα或MHCⅡβ在细胞中共表达后未出现共定位现象。免疫共沉淀结果显示,在野生型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS7细胞后,均能检测到MHCⅡαIi、 MHCⅡβIi和MHCⅡIi复合物,而突变型Ii链与MHCⅡα或(和)MHCⅡβ单转染或三者共转染COS7细胞后,均检测不到MHCⅡαIi、MHCⅡβIi和MHCⅡIi复合物。因此Ii链跨膜区Gln47和Thr50 2个氨基酸对于MHCⅡIi复合体的形成是至关重要的。