畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (7): 1465-1473.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.021
周芳,岳华,张斌,李凡,陈曦,汤承*
ZHOU Fang,YUE Hua,ZHANG Bin,LI Fan,CHEN Xi,TANG Cheng*
摘要:
轮状病毒(rotavirus,RV)VP6基因是RV的主要分子检测靶点,但该基因的点突变会影响RV的分子检测。本试验的目的是在研究牦牛RV VP6基因遗传变异的基础上,建立检测牦牛RV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。采用Prime 5.0设计引物,从30个牦牛腹泻样本中扩增得到14个位于931—1 338 bp牦牛RV VP6基因片段。序列分析结果发现,与牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)相比,牦牛RV VP6基因在931—1 110 bp间出现多处点突变,而在1 100—1 338 bp之间序列高度保守。据此设计检测引物,成功建立了检测牦牛RV的RT-PCR方法,具有良好的特异性和稳定性,只扩增出牦牛RV及BRV的特异片段,对其他无关病原无扩增;检测下限为0.45 pg•μL-1,灵敏性较好。所建立方法对牦牛RV的检出率明显优于现有检测BRV的RT-PCR方法,为牦牛RV病的诊断和流行病学调查提供了可靠的方法;对BRV的检出也与其他方法具有很好的符合率,也可以用于BRV的检测。对234份犊牦牛腹泻粪便样本的RV检出率:西藏为60.00%(36/60)、青海为95.00%(57/60);四川为85.19%(46/54);云南为90.00%(54/60),证明牦牛RV感染是当前导致犊牦牛腹泻的重要原因。
中图分类号: