畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (7): 1096-1102.doi:
董征英1,张伟华2,李冰1,常维山1*
DONG Zhengying1, ZHANG Weihua2, LI Bing1, CHANG Weishan1*
摘要:
本研究旨在通过荧光定量PCR方法研究禽白血病J亚群病毒(ALVJ)在家禽体内各个器官的分布。根据ALVJ NX0101毒株基因5 258—5 510 bp的碱基序列,设计了1对特异性引物,进行RTPCR反应,扩增产物为253 bp,将该产物连接T载体作为Realtime PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Realtime PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性,特异性和重复性试验。然后用已建立的方法对人工感染ALVJ的SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、腺胃进行3次重复检测,将Ct值带入标准曲线公式得出各个组织的病毒拷贝数。试验结果表明:标准曲线线性关系R值均为0.991 4,检测极限约为81拷贝质粒DNA,比RTPCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有ALVJ能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%。通过比较数值以得出胸腺ALVJ基因含量是最高的,肺脏、脾脏、法氏囊含量也比较高,心脏拷贝数最低。自然感染发病鸡各器官ALVJ基因均高于人工感染ALVJ的基因含量。本研究所建立的ALVJ基因实时荧光定量RTPCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,初步探讨了禽白血病J亚群病毒在畜禽体内各个器官的病毒分布。这为以后禽白血病的诊断以及治疗提供了重要的技术支持。