畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (2): 220-225.doi:
赵荣雪1,赵文明1,徐琪1,段修军2,董飚2,孙国波2,毕瑜林1,李秀1,张扬1,黄正洋1,陈国宏1*
ZHAO Rongxue1, ZHAO Wenming1, XU Qi1, DUAN Xiujun2, DONG Biao2,
SUN Guobo2,BI Yulin1,LI Xiu1, ZHANG Yang1, HUANG Zhengyang1, CHEN Guohong1*
摘要: 为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1, PIT1)启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位。利用前期染色体步移技术扩增得到鹅PIT1基因的启动子区序列,经PCR扩增,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3Basic 中,把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体(pGLBasic),制备了一系列启动子缺失体(-1 485/-1 bp、-1 293/-1 bp、-1 014/-1 bp、-775/-1 bp、-561/-1 bp、-353/-1 bp和-206/-1 bp),并通过限性内切酶酶切、PCR 及测序进行鉴定,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转染GH3细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测。本试验所克隆的PIT1基因启动子区具有明显的启动子活性,其中-561/-1 bp的启动活性最强,该区域存在有PIT1、POU3F2、myogenin和GR等多个转录因子结合位点。利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,并且验证了克隆的启动子具有启动活性,找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。