畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (11): 1649-1653.doi:
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汤德元1* ,李春燕1,罗险峰2,黄涛1,曾智勇1,甘振磊1,王凤1
TANG Deyuan1*, LI Chunyan1, LUO Xianfeng2, HUANG Tao1,
ZENG Zhiyong1, GAN Zhenlei1, WANG Feng1
摘要: 本研究根据GenBank登录的猪瘟病毒Shimen和C株的E2基因序列设计1对特异引物,采集来自贵州的疑似猪瘟病死猪组织,提取总RNA,进行RTPCR扩增,将扩增产物测序后进行核苷酸序列比较分析。并将RTPCR产物克隆到pMD18T载体上,构建重组质粒pMD18TE2,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将E2基因亚克隆到pET32a(+)原核表达载体上,成功构建猪瘟病毒E2基因原核表达质粒pET32aE2,将构建好的原核表达质粒pET32aE2转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDSPAGE电泳、Western blot分析,得到了约58 ku的条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化目的蛋白,将目的蛋白加入弗氏佐剂免疫小鼠,免疫后采血检测抗体,结果显示目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为猪瘟亚单位疫苗的研究奠定了基础。