畜牧兽医学报 ›› 2009, Vol. 40 ›› Issue (7): 999-1006.doi:
尹荣华1,字向东1* ,马志杰2,陈绍威1,张大伟1,梁冠男1
YIN Ronghua 1,ZI Xiangdong 1* ,MA Zhijie 2 ,CHEN Shaowei 1 ,ZHANG Dawei 1 , LIANG Guannan 1
摘要: 根据GenBank中普通牛生长分化因子9(GDF9)基因序列(AF 307092)设计1对引物,以麦洼牦牛卵母细胞总RNA为模板,通过RTPCR技术对牦牛GDF9基因cDNA进行克隆测序和序列分析。结果表明:所克隆的1 399 bp片段为预期的牦牛GDF9基因cDNA序列,包含由2个外显子组成的全编码区和3′下游部分序列。牦牛GDF9基因编码区核苷酸序列长度为1 362 bp,编码453个氨基酸,与GenBank中报道的普通牛、水牛、绵羊、山羊相应序列一致,而与人和黑猩猩存在差异。和普通牛相比,牦牛GDF9基因编码区存在1处碱基转换(C→T),导致相应的氨基酸由丙氨酸(A)转换为缬氨酸(V)。牦牛与普通牛、水牛、绵羊、山羊、人和黑猩猩的核苷酸同源性分别为999%、984%、970%、968%、856%和851%;氨基酸同源性分别为998%、971%、951%、954%、794%和795%。利用NJ法和MP法以该基因编码区核苷酸序列构建的物种间分子系统进化树结果基本一致,即牦牛与普通牛先聚为一类,再与水牛聚为一类,而后与绵羊和山羊聚为一类,最后与人和黑猩猩聚为一类。该聚类结果与物种间遗传距离大小一致,也与各物种在动物学上的分类相吻合,表明GDF9基因编码区适用于构建物种间系统进化树。