畜牧兽医学报 ›› 2009, Vol. 40 ›› Issue (7): 1120-1125.doi:
曹军平,胡顺林,吴双,刘慧谋,刘晓文,王晓泉,吴艳涛,刘秀梵*
CAO Junping, HU Shunlin, WU Shuang, LIU Huimou,LIU Xiaowen,
WANG Xiaoquan, WU Yantao , LIU Xiufan*
摘要: 根据新城疫病毒M基因的保守序列,设计合成1对引物和TaqMan 探针,以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RTPCR方法。该方法在106~101拷贝范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中3拷贝·μL-1 的病毒核酸,与传统的病毒分离方法具有相近的敏感性,二者对500份临床禽泄殖腔棉拭样品检测结果阳性数﹑阴性数符合率分别为900%﹑998%。经临床应用表明:荧光定量 PCR 的建立为早期诊断禽新城疫病毒、定量分析禽新城疫病毒感染程度奠定了基础。