畜牧兽医学报 ›› 2007, Vol. 38 ›› Issue (7): 625-629.doi:
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王学敏;刘榜;赵书红;樊斌;朱猛进;余梅;熊统安;李奎
WANG Xue-min;LIU Bang;ZHAO Shu-hong;FAN Bin;ZHU Meng-jin;YU Mei;XIONG Tong-an;LI Kui
摘要: 根据GenBank已发表的猪Sar1b基因序列(GenBank登录号:AY819557)设计1对引物,以猪肝脏组织总RNA的反转录产物为扩增模板,用RT-PCR方法扩增出猪Sar1b基因cDNA全长编码区,经过EcoRI-SalI双酶切后定向克隆于pET28a原核表达载体,获得pET28a-Sar1b重组原核表达载体。将携带有重组原核表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)通过1 mmol/L ITPG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大小大约为26 ku,与预期表达蛋白大小一致。Western blot检测显示该蛋白为His融合蛋白,表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白。猪Sar1b基因的克隆和表达研究,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。