畜牧兽医学报 ›› 2007, Vol. 38 ›› Issue (2): 184-189.doi:

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猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究

张浩吉;谢明权;张健騑;蒲文珺;覃宗华;蔡建平;王政富;顾万军   

  1. 1佛山科学技术学院动物医学系,广东佛山,528231;2广东省农科院兽医研究所,广东广州,510460
  • 收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-02-25 发布日期:2007-02-25
  • 通讯作者: 张浩吉

Study on PCR-Microtiter Plate Hybridization Assay for Detection of Eperythrozoon suis

  • Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-02-25 Published:2007-02-25

摘要: 以猪附红细胞体和多种血营养菌的16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/ HM-r,在反向引物的5' 端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5' 端用地高辛标记,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫法检测方法。通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值,用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2.1012-0.4492×log(x),其相关系数R为0.977,显示对未知样品可进行定量检测。该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和E. wenyonii无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍。应用实验建立的方法,对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性。