畜牧兽医学报 ›› 2005, Vol. 36 ›› Issue (10): 1064-1068.doi:
罗 燕;郭万柱;徐志文;刘艳丽;殷华平;王 新;王小玉;苟 琳
LUO Yan;GUO Wan-zhu; XU Zhi-wen; LIU Yan-li;YIN Hua-ping; WANG Xin;WANG Xiao-yu;GOU Lin
摘要: 将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒, 将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHⅠ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93 ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。